| 蜡样芽孢杆菌胶原酶基因colR75E在毕赤酵母中的重组表达 |
| |
| 引用本文： | 张真,李晔,张西轩,胡双艳,阮海华.蜡样芽孢杆菌胶原酶基因colR75E在毕赤酵母中的重组表达[J].微生物学通报,2017,44(4):807-817. |
| |
| 作者姓名： | 张真 李晔 张西轩 胡双艳 阮海华 |
| |
| 作者单位： | 天津市食品生物技术重点实验室 天津商业大学生物技术与食品科学学院 天津 300134,天津市食品生物技术重点实验室 天津商业大学生物技术与食品科学学院 天津 300134,天津市食品生物技术重点实验室 天津商业大学生物技术与食品科学学院 天津 300134,天津市食品生物技术重点实验室 天津商业大学生物技术与食品科学学院 天津 300134,天津市食品生物技术重点实验室 天津商业大学生物技术与食品科学学院 天津 300134 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No. 31540066，81101220)；天津市中青年骨干创新人才支持计划项目；天津市创新团队建设项目(No. TD12-5049) |
| |
| 摘 要： | 【目的】利用毕赤酵母真核表达系统表达蜡样芽孢杆菌胶原酶Col R75E,寻找一种安全、稳定的方式体外制备具有高活性的胶原酶。【方法】以蜡样芽孢杆菌R75E基因组DNA为模板,采用PCR法扩增胶原酶col R75E基因,构建p PICZαA/col R75E重组质粒,将该质粒线性化后电转化至毕赤酵母X-33菌株,诱导其表达并对表达条件进行优化。将表达后的酵母发酵液上清通过硫酸铵沉淀、脱盐处理及亲和层析纯化步骤获得高纯度重组Col R75E胶原酶。利用胶原酶活力测定、SDS-PAGE电泳、胶原酶谱、I型胶原蛋白及不同底物蛋白降解产物电泳等方法对重组胶原酶Col R75E的活性及底物特异性进行分析。【结果】毕赤酵母中最佳表达重组胶原酶Col R75E的条件为p H 6.0,甲醇终浓度为2.5%,诱导时间72 h,诱导后的蛋白经SDS-PAGE、胶原酶谱以及I型胶原蛋白降解产物电泳分析发现,毕赤酵母中表达的重组胶原酶分子量符合预期,蛋白纯度超过95%,具有较好的胶原蛋白水解活性并测得其比活力为4.977 U/mg。该酶对I型胶原蛋白表现出较好的专一性,但是对牛血清白蛋白、酪蛋白及溶菌酶蛋白没有水解活性。【结论】利用毕赤酵母真核表达系统能够获得高活性的蜡样芽孢杆菌胶原酶Col R75E,为该胶原酶广泛应用于医疗、食品等工业领域奠定了理论和方法基础。
|
| 关 键 词： | 蜡样芽孢杆菌，胶原酶，毕赤酵母，I型胶原蛋白 |
Recombinant expression of Bacillus cereus collagenase colR75E in Pichia pastoris |
| |
| ZHANG Zhen,LI Ye,ZHANG Xi-Xuan,HU Shuang-Yan and RUAN Hai-Hua.Recombinant expression of Bacillus cereus collagenase colR75E in Pichia pastoris[J].Microbiology,2017,44(4):807-817. |
| |
| Authors: | ZHANG Zhen LI Ye ZHANG Xi-Xuan HU Shuang-Yan and RUAN Hai-Hua |
| |
| Institution: | Tianjin Key Laboratory of Food Science and Biotechnology, College of Biotechnology and Food Science, Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China,Tianjin Key Laboratory of Food Science and Biotechnology, College of Biotechnology and Food Science, Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China,Tianjin Key Laboratory of Food Science and Biotechnology, College of Biotechnology and Food Science, Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China,Tianjin Key Laboratory of Food Science and Biotechnology, College of Biotechnology and Food Science, Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China and Tianjin Key Laboratory of Food Science and Biotechnology, College of Biotechnology and Food Science, Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Bacillus cereus Collagenase Pichia pastoris Type I collagen |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《微生物学通报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《微生物学通报》下载免费的PDF全文 |
|
