EphA3基因启动子区域定位表达及活性分析

目的构建含有不同长度EphA3基因启动子片段的报告基因载体，研究其在293T细胞和MEF细胞中的转录活性。方法以Balb／C小鼠基因组DNA为模板，扩增不同长度的EphA3基因启动子片段，并克隆进入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic真核表达载体内。酶切鉴定及基因测序无误后，将重组质粒和pRL—CMV内对照质粒共转染293T和MEF细胞，分析不同长度的OhA3基因启动子片段的转录活性。结果酶切和测序鉴定表明表达载体构建成功，EphA3基因的核心启动子区域位于-279bp～＋110bp之间，在293T细胞和MEF细胞中其转录活性相似。结论成功构建了荧光素报告基因重组质粒，并确定了BphA3基因的核心启动子区域。