| 从伪狂犬病病毒中删除Cre/LoxP介导的报告基因 |
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| 引用本文： | 苏鑫铭,于春梅,王敏秀,陈勇军,曹瑞兵,周斌,陈溥言.从伪狂犬病病毒中删除Cre/LoxP介导的报告基因[J].病毒学报,2006,22(6):456-461. |
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| 作者姓名： | 苏鑫铭 于春梅 王敏秀 陈勇军 曹瑞兵 周斌 陈溥言 |
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| 作者单位： | 南京农业大学,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京,210095 |
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| 摘 要： | 根据pEGFP-C1序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出两端各含一个同向LoxP位点的GFP表达盒,克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-G-LoxP。通过经典同源重组方法,得到表达GFP的TK基因缺失伪狂犬病毒重组毒株S03109。该重组病毒在转染了pOG231(表达Cre重组酶)的293T细胞上连续传代,筛选得到重组病毒株S0419。荧光显微镜观察、Western blot及PCR检测结果表明,S03109感染细胞后持续表达GFP,而S0419不表达GFP。PCR证实S0419为含单个LoxP位点的TK基因缺失病毒,并且在细胞培养上遗传稳定,测序结果(GenBank登录号AY822465)表明,在Cre重组酶的作用下,两个同向LoxP序列之间的GFP表达盒被正确除去。对BALB/c小鼠的半数致死量(LD50)及免疫保护实验结果表明,S03109和S0419对BALB/c小鼠的LD50值均大于3×105PFU,免疫BALB/c小鼠,攻毒后平均存活率分别为67.5%与70%。以上结果表明,利用Cre/LoxP位点特异性重组系统,成功去除了插入重组伪狂犬病病毒基因组中的GFP报告基因。
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| 关 键 词： | 疱疹病毒科 伪狂犬病病毒 TK基因 Cre重组酶 LoxP序列 GFP |
| 文章编号： | 1000-8721（2006）06-0456-06 |
| 收稿时间： | 2006-03-27 |
| 修稿时间： | 2006-03-272006-05-12 |
Cre/LoxP Mediated Report Gene Deletion from Pseudorabies Virus |
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| SU Xin-ming,YU Chun-mei,WANG Min-xiu,CHEN Yong-jun,CAO Rui-bing,ZHOU Bin,CHEN Pu-yan.Cre/LoxP Mediated Report Gene Deletion from Pseudorabies Virus[J].Chinese Journal of Virology,2006,22(6):456-461. |
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| Authors: | SU Xin-ming YU Chun-mei WANG Min-xiu CHEN Yong-jun CAO Rui-bing ZHOU Bin CHEN Pu-yan |
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| Institution: | SU Xin-ming,YU Chun-mei,WANG Min-xiu,CHEN Yong-jun,CAO Rui-bing,ZHOU Bin,CHEN Pu-yan~* |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Herpesviridae pseudorabies virus TK gene Cre recombinase LoxP site GFP |
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