| 新型隐球酵母U6启动子的鉴定、克隆及功能验证 |
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| 引用本文： | 王宇,肖婷婷,朱项阳,赵雪茹,魏东盛,朱旭东.新型隐球酵母U6启动子的鉴定、克隆及功能验证[J].微生物学报,2017,57(2):197-208. |
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| 作者姓名： | 王宇 肖婷婷 朱项阳 赵雪茹 魏东盛 朱旭东 |
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| 作者单位： | 南开大学生命科学学院, 天津 300071,南开大学生命科学学院, 天津 300071,南开大学生命科学学院, 天津 300071,南开大学生命科学学院, 天津 300071,南开大学生命科学学院, 天津 300071,南开大学生命科学学院, 天津 300071;北京师范大学生命科学学院, 北京 100875 |
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| 基金项目： | 天津市自然科学基金（16JCYBJC23800）；国家自然科学基金（81271801） |
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| 摘 要： | 【目的】鉴定及克隆新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)中PolⅢ型的U6启动子(Cn U6启动子),并验证CnU6启动子能否有效转录shRNA及CRISPR/Cas9系统中gRNA。【方法】结合Gen Bank数据库已公布的新型隐球酵母基因组信息和本实验室RNA-seq文库数据,利用生物信息学技术分析得到新型隐球酵母中具有高转录水平的U6RNA序列。使用重叠PCR和Easy Geno方法将预测的CnU6启动子分别克隆到sh RNA及gRNA的上游区域,通过观察shRNA对靶基因的RNAi效果及gRNA引导Cas9核酸酶对靶位点的切割结果,确定CnU6启动子能否转录短RNA。【结果】CnU6启动子能够转录形成shRNA对靶基因进行沉默,并且能转录形成g RNA引导Cas9核酸酶对靶点进行切割。【结论】新型隐球酵母的CnU6启动子被成功鉴定及克隆,它能有效驱动shRNA和gRNA的转录。
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| 关 键 词： | 新型隐球酵母 CnU6启动子 shRNA CRISPR/Cas9 |
| 收稿时间： | 2016/5/18 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/7/6 0:00:00 |
Identification, cloning and functional verification of U6 promoter from Cryptococcus neoformans |
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| Yu Wang,Tingting Xiao,Xiangyang Zhu,Xueru Zhao,Dongsheng Wei and Xudong Zhu.Identification, cloning and functional verification of U6 promoter from Cryptococcus neoformans[J].Acta Microbiologica Sinica,2017,57(2):197-208. |
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| Authors: | Yu Wang Tingting Xiao Xiangyang Zhu Xueru Zhao Dongsheng Wei and Xudong Zhu |
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| Institution: | College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China,College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China,College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China,College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China,College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China and College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China;School of Life Sciences, Beijing Normal University, Beijing 100875, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cryptococcus neoformans CnU6 promoter shRNA CRISPR/Cas9 |
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