中华眼镜蛇心脏毒素(CardiotoxinⅢ)的克隆及其在大肠杆菌和酵母中的表达

心脏毒素cardiotoxinⅢ（CTXⅢ）是中华眼镜蛇毒主要组分之一，根据Genbank中已有的CTXs序列设计特异性引物，从中华眼镜蛇毒中克隆出208bp的CTXⅢ片段，并将该基因片段分别克隆至大肠杆菌His—patch ThioredoxinB载体中，重组CTXⅢ经渗透休克分泌至胞外。将CTXⅢ基因插入酵母pPIC9K分泌型表达载体重组表达，N端带有3个氨基酸（GYT）残基的重组CTXⅢ（rCTXⅢ）分泌量达9．5mg／L，经一步凝胶过滤纯化，其纯度达90％以上，纯化率达65％。经细胞毒性实验检测，纯化的rCTXⅢ 12h的IC50为4．66μg／ml，证实重组蛋白具有良好的生物学活性。