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人结合珠蛋白cDNA 克隆及其在大肠杆菌中的表达和鉴定
引用本文:孟琴 汤伟松 刘亮 李淑珍 唐晓波. 人结合珠蛋白cDNA 克隆及其在大肠杆菌中的表达和鉴定[J]. 现代生物医学进展, 2014, 14(24): 4644-4647
作者姓名:孟琴 汤伟松 刘亮 李淑珍 唐晓波
作者单位:哈尔滨医科大学药学院
基金项目:哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目(2008RFXXS018)
摘    要:目的:克隆人结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)cDNA ,并在大肠杆菌中表达和鉴定。方法:从Hela 细胞中分离总RNA,采用RT-PCR 方法获得人Hp cDNA,分别克隆至原核表达载体pET-32a和PGEX-4T-1,转化至大肠杆菌BL21,IPTG 诱导表达,并进行SDS-PAGE 及Western blot 鉴定。结果: 成功构建了高效原核表达质粒PET-32a-Hp 和PGEX-4T1-Hp;Western 印迹结果表明,经IPTG 诱导,在大肠杆菌中表达了分子量约30 kD和37 kD 的目的蛋白;表达产物经Ni2+-NTA 离子交换树脂纯化, 纯度>90%。结论:在E.coli成功表达和纯化了人Hp 融合蛋白,为进一步开发人Hp 诊断试剂打下基础。

关 键 词:卵巢癌;人结合珠蛋白;克隆;表达;纯化

Cloning, Expression and Identification of Human Hp cDNAin Escherichia coli
MENG Qin,TANG Wei-song,LIU Liang,LI Shu-zhen,TANG Xiao-bo. Cloning, Expression and Identification of Human Hp cDNAin Escherichia coli[J]. Progress in Modern Biomedicine, 2014, 14(24): 4644-4647
Authors:MENG Qin  TANG Wei-song  LIU Liang  LI Shu-zhen  TANG Xiao-bo
Abstract:
Keywords:Oophoromas  Human haptoglobin  Cloning   Expression  Identification
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