| 一种快速精确编辑疱疹病毒基因组的方法 |
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| 引用本文： | 孙爱军,王向茹,杨帅康,刘莹,张改平,庄国庆.一种快速精确编辑疱疹病毒基因组的方法[J].生物工程学报,2021,37(4):1376-1384. |
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| 作者姓名： | 孙爱军 王向茹 杨帅康 刘莹 张改平 庄国庆 |
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| 作者单位： | 1 河南农业大学 动物医学院，河南 郑州 450046;2 河南农业大学 国家动物免疫学国际联合研究中心，河南 郑州 450046 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 31802160)，河南农业大学高层次“拔尖人才”项目 (No. 30500690)，2020年度河南省留学回国人员科研择优项目 (No. 30602136) 资助。 |
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| 摘 要： | 为了快速且准确地对疱疹病毒基因组进行基因敲除、插入或者点突变等修饰，通过同源重组将马立克氏病病毒 (MDV) 超强毒株Md5基因组克隆到细菌人工染色体 (BAC)。将筛选的阳性重组体DNA电转进DH10B菌株，用PCR及限制性片段多态分析 (RFLP) 方法鉴定含Md5全基因组的BAC克隆。将阳性重组体DNA转染入鸡胚成纤维细胞 (CEF)，拯救出重组病毒，命名为Md5BAC。进一步利用Red酶介导的两步法基因重组技术构建MDVlorf10基因敲除毒株。为了验证被敲除基因功能的特异性，将lorf10插入原位点以构建基因复原毒株。将构建的重组毒株分别感染CEF细胞，用间接免疫荧光试验确认重组病毒均包装成功；病毒生长曲线结果表明，lorf10敲除不影响病毒的体外增殖。总之，这为其他疱疹病毒的基因组编辑提供了技术参考。
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| 关 键 词： | 马立克氏病病毒，同源重组，细菌人工染色体，基因组编辑 |
| 收稿时间： | 2020/7/9 0:00:00 |
A rapid and accurate method for herpesviral gnome editing |
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| Aijun Sun,Xiangru Wang,Shuaikang Yang,Ying Liu,Gaiping Zhang,Guoqing Zhuang.A rapid and accurate method for herpesviral gnome editing[J].Chinese Journal of Biotechnology,2021,37(4):1376-1384. |
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| Authors: | Aijun Sun Xiangru Wang Shuaikang Yang Ying Liu Gaiping Zhang Guoqing Zhuang |
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| Institution: | 1 College of Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450046, Henan, China;2 International Joint Research Center of National Animal Immunology, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450046, Henan, China |
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