OKP-B-13型β-内酰胺酶的克隆与表达 |
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引用本文: | 卢月梅,张阮章,王沙燕,胡玉华,穆雪鵾,陈升汶.OKP-B-13型β-内酰胺酶的克隆与表达[J].中国微生态学杂志,2010,22(2):146-148. |
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作者姓名: | 卢月梅 张阮章 王沙燕 胡玉华 穆雪鵾 陈升汶 |
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作者单位: | 深圳市人民医院,暨南大学第二临床学院,广东,深圳,518020 |
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摘 要: | 目的构建OKP-B-13型β-内酰胺酶的表达载体。方法抽提菌株的质粒,应用PCR扩增OKP-B-13基因全长编码序列,扩增产物经Nde I、Xho I酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得879 bp的产物,重组表达载体经Nde I、Xho I酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体pET-26b(+)/OKP-B-13]构建成功。目的等电点为7.1。结论β-内酰胺酶OKP-B-13在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件。
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关 键 词: | β-内酰胺酶 原核表达 等电聚焦电泳 |
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