| 摘 要： | 为了研究过氧化物还原酶1 (peroxiredoxin 1, Prdx1)在巨噬细胞极化过程中的作用,使用脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)联合干扰素γ (interferon gamma, IFNγ)、白细胞介素-4 (interleukin-4, IL-4)处理小鼠白血病单核巨噬细胞(mouse leukemia cells of monocyte macrophage, RAW264.7),敲除Prdx1标记为Prdx1-/-组,采用流式细胞术检测巨噬细胞分化标志物,采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测细胞因子水平,检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric-oxide synthase, iNOS)和精氨酸酶-1 (arginase-1, Arg-1)活性反应以及Prdx1-/-细胞氧化损伤情况,通过能量分析仪检测细胞胞外酸化率和氧消耗速率,线粒体膜电位染料(mitochondrial membrane potential dye, JC-1)荧光探针法检测线粒体膜电位,荧光染色法检测线粒体超氧化物水平,并用线粒体活性氧(reactive oxygen species, ROS)清除剂处理RAW264.7细胞来评估细胞极化情况。结果表明,敲除Prdx1导致巨噬细胞ROS、过氧化氢和8-羟基-2-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine, 8-OHDG)水平升高,线粒体拷贝数降低,线粒体内膜转位酶23 (translocase of inner mitochondrial membrane 23, TIM23)蛋白和热休克蛋白60 (heat shock protein 60, HSP60)表达减少,线粒体膜电位下降,超氧化物增多,三磷酸腺苷(adenosine-triphosphate, ATP)水平降低;在1型巨噬细胞(type 1 macrophage, M1)中敲除Prdx1,细胞外酸化率(extra cellular acidification rate, ECAR)增加,在2型巨噬细胞(type 2 macrophage, M2)中敲除Prdx1,耗氧率(oxygen consumption rate, OCR)降低。这表明敲除Prdx1能够通过损伤巨噬细胞线粒体来降低其氧化磷酸化功能,导致巨噬细胞倾向M1型极化而抑制其向M2型极化,本研究可为巨噬细胞介导的免疫治疗提供新的治疗策略。
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