斑马鱼Gfi1.1基因的克隆及其体外转录 |
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引用本文: | 朱贤敏姜利军赵磊关军尹琎张义成.斑马鱼Gfi1.1基因的克隆及其体外转录[J].现代生物医学进展,2014,14(10):1818-1820. |
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作者姓名: | 朱贤敏姜利军赵磊关军尹琎张义成 |
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作者单位: | 华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科,湖北武汉430030 |
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摘 要: | 目的:克隆斑马鱼Gfi1.1基因的全长cDNA,运用T7 RNA聚合酶对含有Gfi1.1基因的ORF区进行体外转录,在体外合成5端带有帽子结构的Gfi1.1 mRNA分子,为后续研究斑马鱼Gfi1.1基因的功能打下基础。方法:应用RT-PCR从斑马鱼组织中扩增出Gfi1.1 cDNA片段,经回收纯化与pGM-T载体连接并转化感受态细菌DH-5α,通过蓝白筛选酶切鉴定阳性菌落,小量提取质粒,Nde I限制性内切酶线性化pGM-T-Gfi1.1质粒,运用T7 RNA聚合酶对Gfi1.1基因进行体外转录及加帽。经凝胶电泳对目的片段进行鉴定。结果:RT-PCR扩增获得约1.2 kb的DNA片段,DNA序列分析的结果与GenBank上的序列(NM_001020776)一致,酶切线性化及体外转录加帽pGM-T-Gfi1.1,凝胶电泳鉴定RNA分子大小与预期完全一致。结论:成功克隆斑马鱼Gfi1.1基因并体外转录及加帽pGM-T-Gfi1.1。
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关 键 词: | Gfi1 1基因 克隆 体外转录 |
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