| 一种用于提高基因打靶效率的双荧光筛选策略 |
| |
| 引用本文： | 陈建武,任红艳,华文君,刘西梅,綦世金,周黎,欧阳艳,毕延震,杨烨,郑新民.一种用于提高基因打靶效率的双荧光筛选策略[J].中国生物工程杂志,2017,37(1):58-63. |
| |
| 作者姓名： | 陈建武 任红艳 华文君 刘西梅 綦世金 周黎 欧阳艳 毕延震 杨烨 郑新民 |
| |
| 作者单位： | 1. 长江大学动物科学学院 荆州 434025;
2. 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室 武汉 430064;
3. 湖北三峡职业技术学院农学院 宜昌 443000 |
| |
| 基金项目： | 转基因生物新品种培育科技重大专项（2016ZX08006001-005，2016ZX08006002-006，2016ZX08010003-006），湖北省科技支撑计划（2014BBB010），湖北省农业科技创新中心（2016-620-000-001-027）资助项目 |
| |
| 摘 要： | 同源重组介导的基因打靶技术因其准确性高、引入的突变可以预测,已经成为功能基因组研究的重要工具。但是在真核生物体内,天然同源重组的概率极低,对后续的筛选和鉴别造成很大困扰。因此,建立一个广谱性的高效筛选策略极为重要。研究基于"双荧光"的可视化筛选,通过提高筛选效率,从而建立了一种显著提高同源重组打靶效率的新策略。该策略以绿色荧光蛋白基因和新霉素基因为正筛选标记,以红色荧光蛋白基因为负筛选标记。经过G418筛选后,挑取仅表达绿色荧光蛋白的抗性克隆,用于跨界PCR检测。研究尝试运用上述新策略,借助CRISPR/Cas9技术,对猪肌抑素基因进行同源重组介导的基因打靶。在选取的T1和T2两个靶位点处,"双荧光"策略筛选的细胞阳性率分别达到80.5%和86.7%,筛选效率得到显著提高。研究建立的"双荧光"可视化筛选策略具有高效性和广谱性,在动物基因编辑领域具有广阔的应用前景。
|
| 关 键 词： | 肌抑素 CRISPR/Cas9 基因打靶 同源重组 |
| 收稿时间： | 2016-07-12 |
A Double Fluorescence Screening Strategy to Enhance the Efficiency of Gene Targeting |
| |
| CHEN Jian-wu,REN Hong-yan,HUA Wen-jun,LIU Xi-mei,QI Shi-jin,ZHOU Li,OU Yang-yan,BI Yan-zhen,YANG Ye,ZHENG Xin-min.A Double Fluorescence Screening Strategy to Enhance the Efficiency of Gene Targeting[J].China Biotechnology,2017,37(1):58-63. |
| |
| Authors: | CHEN Jian-wu REN Hong-yan HUA Wen-jun LIU Xi-mei QI Shi-jin ZHOU Li OU Yang-yan BI Yan-zhen YANG Ye ZHENG Xin-min |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Gene targeting CRISPR/Cas9 Homologous recombination Myostatin |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》下载免费的PDF全文 |
|
