利用受体漂白荧光共振能量转移技术研究β-分泌酶在活细胞内的二聚化 |
| |
引用本文: | 陆锦玲,储军,杨杰,曾绍群,骆清铭,张智红.利用受体漂白荧光共振能量转移技术研究β-分泌酶在活细胞内的二聚化[J].生物化学与生物物理进展,2008,35(3):268-273. |
| |
作者姓名: | 陆锦玲 储军 杨杰 曾绍群 骆清铭 张智红 |
| |
作者单位: | 华中科技大学Britton Chance生物医学光子学研究中心,武汉光电国家实验室(筹),武汉,430074 |
| |
基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划)
,
国家自然科学基金 |
| |
摘 要: | β淀粉样肽(Aβ)在阿尔茨海默病(AD)患者脑内的产生、聚集和沉积是AD的一个固有病理特征,也被普遍认为是AD的重要发病机理之一.β-分泌酶(BACE)对淀粉样前体蛋白(APP)的裂解是Aβ产生的关键步骤,β-分泌酶抑制剂是AD药物治疗的一个重要发展方向,因此对BACE结构的了解具有重要意义.利用受体漂白荧光共振能量转移(FRET)技术首次在活细胞内研究BACE的二聚化结构.通过基因工程技术分别构建了青色荧光蛋白(CFP)和黄色荧光蛋白(YFP)标记的全长BACE(BACE-FL)和BACE活性部分(BACE-NT),应用共聚焦荧光显微镜和受体漂白FRET技术研究了BACE-FL和BACE-NT在细胞中的表达和定位,以及它们在活细胞内的存在形式.实验结果表明:a.BACE-FL在内质网至细胞膜均有表达,主要分布在高尔基体、细胞膜和内体等细胞器中,而BACE-NT则被滞留在内质网里.b.BACE-NT是单体结构,而BACE-FL在活细胞内则以二聚体的形式存在.证明,BACE的跨膜序列和C端对BACE的转运和定位具有重要作用,其二聚体结构由这些序列决定,而不由其活性位点决定.
|
关 键 词: | β-分泌酶 二聚化 阿尔茨海默病 荧光共振能量转移 受体漂白 利用 受体 漂白 荧光共振能量转移 技术研究 分泌酶 胞内 二聚化 Detection FRET Photobleaching Acceptor Cells Living Dimerization 活性位点 作用 序列 跨膜 二聚体 |
收稿时间: | 2007/7/12 0:00:00 |
修稿时间: | 2007年7月12日 |
本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录! |
| 点击此处可从《生物化学与生物物理进展》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《生物化学与生物物理进展》下载免费的PDF全文 |
|