| 重组毕氏酵母中降解hIFNβ-HSA蛋白酶的鉴定及其活性控制 |
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| 引用本文： | 宋一丹,窦文芳,许泓瑜,金坚,陆茂林,许正宏.重组毕氏酵母中降解hIFNβ-HSA蛋白酶的鉴定及其活性控制[J].生物加工过程,2008,6(5):50-54. |
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| 作者姓名： | 宋一丹 窦文芳 许泓瑜 金坚 陆茂林 许正宏 |
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| 作者单位： | 1. 江南大学,医药学院制药工程实验室,无锡,214122
2. 江苏省微生物研究所,无锡,214122
3. 江南大学,医药学院制药工程实验室,无锡,214122;江苏省微生物研究所,无锡,214122 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)专题计划，教育部跨世纪优秀人才培养计划，上海市科学技术委员会生物医药重大科技攻关资助项目 |
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| 摘 要： | 研究了重组毕赤酵母KM71／pPIC9K—IFNβ-HSA表达融合蛋白hIFNβ—HSA过程中产物降解的问题。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和Western—Blotting分析结果表明，发酵液中除了9．0×10^4的目的融合蛋白hIFNβ-HSA外，同时还出现了6．5×10^4的降解带，进一步结合HPLC分析证实该降解发生在融合蛋白hIFNβ—HSA的HSA区域。在此基础上，采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）活性电泳的方法，确定在融合蛋白hIFNβ-HSA表达的过程中，引起融合蛋白hIFNβ-HSA降解的蛋白酶为蛋白酶B（Proteinase B，PrB）。最后，确定了可以抑制融合蛋白hIFNβ-HSA降解的最佳的蛋白酶抑制剂EDTA，通过在诱导表达阶段添加不同浓度的蛋白酶抑制剂EDTA，使融合蛋白的表达量达到22．18mg/mL，与空白对照组相比增加了61％。
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| 关 键 词： | 毕赤酵母 蛋白酶 SDS—PAGE 高效液相色谱 人β干扰素-血清白融合蛋白 抑制剂 |
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