| 克氏梭菌硫解酶的鉴定及其功能研究 |
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| 引用本文： | 杨娇,任聪,徐岩.克氏梭菌硫解酶的鉴定及其功能研究[J].微生物学报,2019,59(1):79-92. |
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| 作者姓名： | 杨娇 任聪 徐岩 |
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| 作者单位： | 江南大学生物工程学院酿酒科学与酶技术研究中心;江南大学教育部工业生物技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（21706097，31530055） |
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| 摘 要： | 【目的】硫解酶是梭菌属微生物合成短中链脂肪酸的关键酶。克氏梭菌(Clostridium kluyveri)具有3个高度同源的硫解酶编码基因,对这3个基因的功能鉴定是解析克氏梭菌高己酸合成能力的关键。【方法】通过发酵动力学分析确定克氏梭菌的己酸和丁酸生成动力学特征;转录组测序结合反转录-荧光定量RCR分析克氏梭菌3个硫解酶编码基因的表达水平和时序表达特征;在大肠杆菌中异源表达这3个硫解酶,并对其硫解酶动力学参数进行测定。【结果】克氏梭菌生成丁酸、己酸、辛酸,其中己酸为主要代谢产物;转录组数据显示,在乙酸消耗完全之前,thlA1基因维持恒定表达,thlA2基因表达时序上调,thlA3基因表达时序下调,转录组测序表明3个硫解酶编码基因均具有较高水平的转录活性,thlA2和thlA3的最高表达量分别约为thlA1的29%和43%;硫解酶动力学参数测定结果表明,克氏梭菌3个硫解酶对于四碳底物均显示出相似的底物亲和力(K_m),但ThlA1对四碳底物的催化效率(k_(cat)/K_m)略低于ThlA2和ThlA3。【结论】克氏梭菌的3个硫解酶均具有催化活性,在克氏梭菌体内均呈活跃表达,表明克氏梭菌拥有3个具有催化活性的硫解酶,这为后续深入研究克氏梭菌己酸合成机理奠定了基础。
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| 关 键 词： | 克氏梭菌 己酸 硫解酶 转录组 |
| 收稿时间： | 2018/2/9 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2018/5/4 0:00:00 |
Identification and functional analysis of the three thiolases from Clostridium kluyveri |
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| Jiao Yang,Cong Ren and Yan Xu.Identification and functional analysis of the three thiolases from Clostridium kluyveri[J].Acta Microbiologica Sinica,2019,59(1):79-92. |
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| Authors: | Jiao Yang Cong Ren and Yan Xu |
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| Institution: | Brewing and Enzyme Technology Center, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China,Brewing and Enzyme Technology Center, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China;Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China and Brewing and Enzyme Technology Center, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China;Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China |
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