| 一种强力霉素诱导型白念珠菌基因敲除与筛选标记再循环工具包 |
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| 引用本文： | 常鹏,尹华,王文娟,陈江野.一种强力霉素诱导型白念珠菌基因敲除与筛选标记再循环工具包[J].微生物学报,2019,59(1):68-78. |
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| 作者姓名： | 常鹏 尹华 王文娟 陈江野 |
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| 作者单位： | 西南大学资源环境学院生物能源与环境修复研究中心;中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所 |
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| 基金项目： | 中央高校基本科研业务费专项资金（XDJK2017C083）；重庆市博士后科学基金（Xm2017023） |
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| 摘 要： | 【目的】在白念珠菌中建立一个快捷方便经济的基因敲除与筛选标记再循环的DNA操作系统。【方法】通过ExoIII介导的不依赖于连接酶的克隆策略,在异源筛选标记基因CmLEU2、CdHIS1和CdARG4基因的两侧分别插入了loxP位点,成为筛选标记基因盒扩增的模板。全基因合成了经过白念珠菌密码子优化的rTetR元件,并组装成Tet-on启动子。将密码子优化的重组酶Cre基因置于该启动子控制下。然后将他们插入筛选标记基因CdHIS1和CdARG4的CDS区域,形成筛选标记基因再循环载体。【结果】构建了3个用于白念珠菌基因敲除的侧翼含有loxP位点的筛选标记基因载体,以及2个含有Tet-on启动子控制的Cre酶的载体用于筛选标记基因的再循环。【结论】成功构建了一个白念珠菌中可诱导的基因敲除和筛选标记再循环的载体系统并成功应用于多个基因缺失株构建。这个系统有助于快速构建白念珠菌的单基因和多基因敲除菌株。
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| 关 键 词： | 白念珠菌 基因敲除 Tet-on 筛选标记再循环 Cre loxP |
| 收稿时间： | 2018/2/8 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2018/4/2 0:00:00 |
A doxycycline-inducible gene deletion and marker recycling toolkit in Candida albicans |
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| Peng Chang,Hua Yin,Wenjuan Wang and Jiangye Chen.A doxycycline-inducible gene deletion and marker recycling toolkit in Candida albicans[J].Acta Microbiologica Sinica,2019,59(1):68-78. |
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| Authors: | Peng Chang Hua Yin Wenjuan Wang and Jiangye Chen |
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| Institution: | Research Center of Bioenergy & Bioremediation, College of Resources and Environment, Southwest University, Chongqing 400715, China,Research Center of Bioenergy & Bioremediation, College of Resources and Environment, Southwest University, Chongqing 400715, China,Shanghai Institute of Biochemistry and Cell Biology, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China and Shanghai Institute of Biochemistry and Cell Biology, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Candida albicans gene deletion Tet-on marker recycling Cre loxP |
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