尼古丁受体CHRNA5 亚基突变对其功能影响的初步研究 |
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引用本文: | 彭 芳,王懿春,廖广园,洪 玮,杨嘉琳,高元妹.尼古丁受体CHRNA5 亚基突变对其功能影响的初步研究[J].现代生物医学进展,2021(21):4033-4037. |
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作者姓名: | 彭 芳 王懿春 廖广园 洪 玮 杨嘉琳 高元妹 |
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作者单位: | 广州医科大学附属第三医院重症医学科 广东 广州 510150;广州医科大学附属第一医院呼吸疾病国家重点实验室 广东 广州 510120 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(82000045) |
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摘 要: | 摘要 目的:研究CHRNA5亚基突变对尼古丁受体功能的影响。方法:通过RT-PCR克隆CHRNA5基因片段,并通过重叠延伸PCR方法对CHRNA5亚基基因定点突变,从而构建CHRNA5突变型及野生型表达载体,然后转染至HEK293T细胞中,检测其基因表达。并将其分别与CHRNA3和CHRNB4共转至HEK293T细胞中,检测三质粒共转后的基因表达;通过采用尼古丁持续灌流细胞10 min,然后检测细胞内钙离子内流峰值的变化情况,接下来检测突变对转染后细胞活力的影响。结果:构建的CHRNA5表达载体在转染HEK293T细胞48 h后,能够检测到绿色荧光蛋白的表达,这证明重组载体已成功转染进HEK293T细胞;通过RT-PCR检测出转染细胞CHRNA5 mRNA表达,这证明CHRNA5突变型和野生型均在HEK293T细胞中成功进行了表达。通过尼古丁灌流细胞实验显示突变组和野生型组F340/F380峰值变化均值分别为0.865±0.048和0.447±0.127,突变体组峰值显著高于野生型组(P<0.05)。细胞活力检测实验发现0.01 mM和0.1 mM尼古丁刺激下突变组的细胞活力峰值分别为139%和137%,显著高于野生组的124%和126%,有显著差异(P<0.05)。结论:本研究成功构建了CHRNA5突变及野生型真核表达载体,发现CHRNA5的突变会导致其受体功能性改变,并影响细胞活力。
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关 键 词: | 尼古丁受体 CHRNA5 细胞活力 |
收稿时间: | 2021/2/6 0:00:00 |
修稿时间: | 2021/2/28 0:00:00 |
A Preliminary Research about the Mutation of CHRNA5 on Effects of nAchR Function |
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Abstract: | |
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Keywords: | Nicotinic acetylcholine receptors CHRNA5 Cell viability |
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