| 以粘粒为基础产生重组单纯疱疹病毒HSV1-lacZ的研究 |
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| 引用本文： | 吴小兵,董小岩,伍志坚,颜子颖,侯云德.以粘粒为基础产生重组单纯疱疹病毒HSV1-lacZ的研究[J].病毒学报,1998,14(4):359-364. |
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| 作者姓名： | 吴小兵 董小岩 伍志坚 颜子颖 侯云德 |
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| 作者单位： | 中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室，第一军医大学分子免疫学研究所 |
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| 摘 要： | 将总长度为１５２ｋｂ的单纯疱疹病毒１型（ＨＳＶ－１）（１７株）基因组分成５个相互间有部分重叠的大片段（约３５－４０ｋｂ），分别克隆到粘粒ＳｕｐｅｒＣｏｓＭＷ中，依次称为ｃｏｓ４８、ｃｏｓ２８、ｃｏｓ６、ｃｏｓ１４和ｃｏｓ５６（ＤａｖｉｓｏｎＡＪｅｔａｌ，１９９３）。此５个粘粒用ＰａｃⅠ切去粘粒骨架后共转染细胞，可发生同源重组而产生野生型ＨＳＶ－１。以此为基础，利用粘粒ｃｏｓ５６的ＨＳＶ－１ＵＬ４４基因中含有一个ＸｂａⅠ单一酶切位点的特点，将一个两端加有ＸｂａⅠ位点的ＣＭＶ－ｌａｃＺ－ｐｏｌｙＡ片段插入其中，构建成ｃｏｓ５６－ｌａｃＺ。将ｃｏｓ５６－ｌａｃＺ与其它４个粘粒经ＰａｃⅠ酶切后，用ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ转染试剂共转染ＢＨＫ－２１细胞，３７℃培养２－３天，开始出现细胞病变及噬斑。５天后将病变细胞连同培养液一起冻融３次，取上清０．１ｍｌ感染新鲜的ＢＨＫ－２１细胞，３７℃培养２４小时，用Ｘ－ｇａｌ染色３０－６０分钟，镜下观察可见大量蓝色噬斑。蓝色噬斑数占噬斑总数的５０％以上。经空斑纯化的蓝斑病毒可稳定传代。这种方法同将外源基因表达盒插入ＨＳＶｔｋ基因中构建成重组质粒，再与ＨＳＶ－１基因组ＤＮＡ共转染细
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| 关 键 词： | 重组单纯疱疹病毒，粘性质粒，β－半乳糖苷酶基因 |
THE GENERATION OF RECOMBINANT HERPES SIMPLEX VIRUS HSV1-lacZ100 BASED ON A SET OF COSMIDS |
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| Wu Xiaobing,Dong Xiaoyan,Wu Zhijian,Yan Ziying,Hou Yunde.THE GENERATION OF RECOMBINANT HERPES SIMPLEX VIRUS HSV1-lacZ100 BASED ON A SET OF COSMIDS[J].Chinese Journal of Virology,1998,14(4):359-364. |
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| Authors: | Wu Xiaobing Dong Xiaoyan Wu Zhijian Yan Ziying Hou Yunde |
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| Keywords: | Recombinant HSV-1 Cosmids lacZ |
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