从噬菌体显示程序中筛选抗响尾蛇毒素的组合抗体的特异性和结合亲和性

我们用 Pharmacia公司的重组噬菌体抗体系统的组合方法制出一种对响尾蛇毒素特异的、具有高亲和力的单克隆单链抗体可变区 (sc Fv)。筛选出一个高亲和力的克隆 ,编号为 A1 0 G,对其 DNA进行了测序。A1 0 G蛋白显示出高的反应特异性 ,只与响尾蛇神经毒素、concolor毒素和 Mojave毒素有密切的关系。用第二组磷脂酶 A2 s (PLA2 s)筛选 ,与 1 1种显示出交叉反应。第一组磷脂酶 A2 s (PLA2 s)在 ELISA中有交叉反应。编码A1 0 G的基因被亚克隆到一个表达载体 ,结果表达非融合蛋白 ,标记为 A1 0 GPE,复性、纯化至表面均一性。A1 0 G与完整响尾蛇毒素和响尾蛇毒素基本亚单位的解离常数分别为 7× 1 0 - 1 0 M和 6.8× 1 0 - 9M。当 A1 0 GPE与响尾蛇毒素基本亚单位或响尾蛇全毒素以摩尔比 5 :1预先孵育 ,则没有抑制磷脂酶活性现象。然而 ,表达蛋白可以在小鼠中部分中和响尾蛇毒素同系物 -Mojave毒素的致死率