| 酵母高效克隆表达T载体pYES2-T的构建及应用 |
| |
| 引用本文： | 曹雪松,曹高燚,武俊杰,詹瑶,丁博,李明,谢晓东.酵母高效克隆表达T载体pYES2-T的构建及应用[J].基因组学与应用生物学,2020,39(6):2607-2613. |
| |
| 作者姓名： | 曹雪松 曹高燚 武俊杰 詹瑶 丁博 李明 谢晓东 |
| |
| 作者单位： | 天津农学院农学与资源环境学院,天津市作物抗逆的机理及遗传改良国际联合研究中心,天津,300384;天津农学院农学与资源环境学院,天津市作物抗逆的机理及遗传改良国际联合研究中心,天津,300384;天津农学院农学与资源环境学院,天津市作物抗逆的机理及遗传改良国际联合研究中心,天津,300384;天津农学院农学与资源环境学院,天津市作物抗逆的机理及遗传改良国际联合研究中心,天津,300384;天津农学院农学与资源环境学院,天津市作物抗逆的机理及遗传改良国际联合研究中心,天津,300384;天津农学院农学与资源环境学院,天津市作物抗逆的机理及遗传改良国际联合研究中心,天津,300384;天津农学院农学与资源环境学院,天津市作物抗逆的机理及遗传改良国际联合研究中心,天津,300384 |
| |
| 基金项目： | 本研究由国家自然科学基金;天津市高校创新团队和天津市农委项目 |
| |
| 摘 要： | 为了在酵母中高通量、高效率地对外源基因进行克隆和表达,本研究以酵母表达载体pYES2为基础,构建高效克隆表达T载体。pYES2是酿酒酵母的一种高效表达载体,在其多克隆位点处设计插入XcmⅠ-Intron-XcmⅠ片段,同时将其载体中URA3基因中原有的XcmⅠ酶切位点进行定点突变,构建出pYES2-T酿酒酵母高效表达T载体。利用XcmⅠ酶切载体pYES2-T,使其产生两个突出的T末端,一方面可以通过PCR产物加A的方式直接进行TA克隆;另一方面可在半乳糖诱导启动子的调控下,对TA克隆后的外源基因在酵母中诱导表达。利用该系统高通量地对人工合成耐盐系列基因NLEAs进行筛选,研究结果表明,该系统可以在酿酒酵母中一步式完成片段克隆及耐盐基因的筛选。本研究构建的酵母表达T载体使用方便、效率高、成本低,应用前景广阔。
|
| 关 键 词： | 酿酒酵母 表达T载体 载体构建 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
