| 特异性抑制伪狂犬病毒EP0基因表达的siRNA分子的合成与筛选 |
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| 引用本文： | 习杨,周锐,郭洪,胡勤芹,方六荣,陈焕春.特异性抑制伪狂犬病毒EP0基因表达的siRNA分子的合成与筛选[J].Virologica Sinica,2006,21(6):565-570. |
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| 作者姓名： | 习杨 周锐 郭洪 胡勤芹 方六荣 陈焕春 |
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| 作者单位： | 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室 湖北武汉430070 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（30471293） |
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| 摘 要： | EP0基因是伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)的早期基因,可能与病毒复制及潜伏感染等有关。为了筛选特异性抑制EP0基因表达的siRNA序列,本研究按照Ambion公司公布的siRNA分子设计原则,设计并合成了3个针对PRVEa株EP0基因的siRNA模板EP04、EP08和EP12,分别克隆到以CMV启动子的siRNA表达载体pSilencer4.1-CMVneo中,构建相应的重组表达质粒p4.1-EP04、p4.1-EP08和p4.1-EP12。同时,将EP0基因的编码区克隆到真核表达载体pEGFP-N3中,按照读码框架与EGFP基因的5’端融合,获得重组表达质粒pEP0-EGFP。将p4.1-EP04、p4.1-EP08、p4.1-EP12和阴性对照质粒p4.1-NK分别与pEP0-EGFP共转染IBRS-2细胞,荧光显微镜观察、流式细胞仪和半定量RT-PCR检测结果表明,三个siRNA分子均能不同程度地抑制EP0基因的表达,抑制效率从高到低依次为EP08、EP12和EP04;在进一步的病毒感染实验中也得到了与细胞转染模型一致的结论。这为深入研究EP0基因在PRV复制和潜伏感染中的作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | siRNA 伪狂犬病毒 EP0 |
| 收稿时间： | 2006-04-06 |
| 修稿时间： | 2006-07-20 |
Synthesis and Selection of siRNAs Specifically Inhibiting the Expression of the EP0 Gene of Pseudorabies Virus |
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| XI Yang, ZHOU Rui, GUO Hong, HU Qin-qin, FANG Liu-rong, CHEN Huan-chun.Synthesis and Selection of siRNAs Specifically Inhibiting the Expression of the EP0 Gene of Pseudorabies Virus[J].中国病毒学(英文版),2006,21(6):565-570. |
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| Authors: | XI Yang ZHOU Rui GUO Hong HU Qin-qin FANG Liu-rong CHEN Huan-chun |
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| Institution: | State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University Wuhan 430070, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | siRNA Pseudorabies virus EP0 |
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