核桃细菌性黑斑病菌rpfG基因的功能分析

目的] 本研究旨在揭示核桃细菌性黑斑病菌（Xanthomonas arboricola pv.juglandis，Xaj） DW3F3中rpfG基因的生物学功能，从而为核桃细菌性黑斑病防治药剂的开发提供作用靶点。方法] 以野油菜黄单胞菌（Xanthomonas campestris pv.campestris，Xcc）8004菌株以及水稻白叶枯病菌（Xanthomonas oryzae pv.oryzae，Xoo） PXO99^A的rpfG基因为模板序列，对Xaj野生型菌株DW3F3的基因组序列进行检索。利用同源重组技术，对Xaj中rpfG基因进行敲除，并用生物化学方法对基因缺失菌株的相关毒力因子、抗逆性进行检测。结果] 通过同源比对，在XajDW3F3的基因组中发现了与XccrpfG、XoorpfG同源的基因，并成功获得rpfG的缺失突变株ΔrpfG。与野生型相比，突变株ΔrpfG的生物被膜形成能力仅为野生型XajDW3F3的44.58%；胞外多糖产量也由野生型的8.47 mg/mL降为5.23 mg/mL；ΔrpfG的絮凝活性增加，能使菌液变澄清；运动性实验显示ΔrpfG的运动直径比野生型增加了12.38%；胞外酶的分泌也发生了不同程度的改变，突变株分泌纤维素酶的能力极显著降低，淀粉酶活性有所提高，而分泌蛋白酶的能力未发生变化；此外rpfG缺失后，Xaj对逆境（盐、酸、SDS、硫酸铜）的耐受力降低。结论] 结果表明rpfG基因能影响核桃细菌性黑斑病菌的致病相关性状，并赋予了细菌一定的抗逆性。

Functional analysis of rpfG gene in Xanthomonas arboricola pv. juglandis