| 使用优化的信号肽和密码子在Expi293F细胞中高表达重链抗体可变区抗体 |
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| 作者姓名： | 谭书桢 董虎 潘颂佳 穆素雨 陈永杰 张韵 孙世琪 郭慧琛 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室, 甘肃 兰州 730000;中国农业科学院兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室, 甘肃 兰州 730000;甘肃农业大学 动物医学院, 甘肃 兰州 730070;甘肃省病原生物学基础学科研究中心, 甘肃 兰州 730046 |
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| 基金项目： | 成都农业科技中心地方财政专项资金项目(NASC2024KR06);兰州市人才创业创新项目(2023-RC-3);国家自然科学基金(32072847,32072859,32301127);甘肃省重大科技专项(23ZDNA007);甘肃省自然科学基金(22JR5RA032,23JRRA551);中国博士后科学基金(2023M733819);甘肃省博士后专项项目(23JRRA554) |
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| 摘 要： | 重链抗体可变区抗体(variable domain of heavy-chain antibody, VHH)已被广泛用于药物治疗、诊断和研究。大肠杆菌是生产VHH最常用的表达系统,但可能会导致VHH的生物活性降低。哺乳动物细胞是目前最理想的VHH表达宿主之一。本研究通过优化VHH的信号肽(signal peptide, SP)和密码子,以期提高VHH在Expi293F细胞中的产量。VHH1-Fc被用于筛选SP,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)筛选出的SP IFN-α2分泌效果最佳;通过提高基因的GC3和GC含量,VHH1的产量提高了约1倍,且对VHH1与A型塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)的结合活性无明显影响;其他5种重组VHHs分别连接SP IFN-α2并进行密码子优化,其平均产量大于191.6 mg/L。此外,这些VHHs在培养上清中具有高纯度和高回收率的优点。本研究证实SP IFN-α2和密码子优化可以在Expi293F细胞高效表达VHH,为VHH的大规模生产提供了参考。
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| 关 键 词： | 重链抗体可变区抗体 信号肽 密码子优化 表达 |
| 收稿时间： | 2023-11-05 |
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