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| 高质量甘蔗基因组DNA的简便快速提取方法研究 | |
| 引用本文： | 黄东亮,覃肖良,廖青,高轶静,方锋学.高质量甘蔗基因组DNA的简便快速提取方法研究[J].生物技术通报,2010(5). |
| 作者姓名： | 黄东亮 覃肖良 廖青 高轶静 方锋学 |
| 作者单位： | 1. 广西甘蔗研究所,南宁,530007 2. 中国农业大学,北京,100083 3. 广西农业科学院农业资源与环境研究所,南宁,530007 |
| 基金项目： | 广西青年科学基金项目，广西甘蔗研究所基本科研业务专项项目 |
| 摘 要： | 甘蔗是世界上重要的糖料作物和能源作物。目前,甘蔗分子生物学研究已成为甘蔗研究的热点之一。基因组DNA的提取是进行甘蔗分子生物学研究的基础。本研究设计含一系列SDS浓度的提取液,同时设加液氮和不加液氮研磨的对比试验,提取甘蔗不同部位叶片的基因组DNA并进行产量和纯度检测以及分子生物学分析。结果表明,所有提取液提取的甘蔗基因组DNA纯度均很高,A260/A280在1.8-2.0之间,A260/A230大于2,但提取液I(0.75%SDS)提取的甘蔗基因组DNA产量较低;加液氮与否对甘蔗基因组DNA的提取产量和纯度没有影响;以提取的甘蔗基因组DNA为模板,分别用一对扩增SPS(蔗糖磷酸合成酶)基因部分片段的引物和一对ISSR引物进行PCR扩增,所有DNA均能扩增出预期的条带;用不同的限制性内切酶对所提取的甘蔗基因组DNA进行酶切,所有DNA样品均能完全酶切。本研究得出最佳甘蔗基因组DNA提取方法如下:磨碎甘蔗叶片后,加DNA提取液(SDS:1.5%;Tris:100 mM;EDTA:20 mM;NaCl:500 mM)于65℃裂解30 min,经酚∶氯仿和氯仿各抽提一次,可获得高产量高质量的甘蔗基因组DNA,能满足后续分子生物学研究的要求。 |
| 关 键 词： | 甘蔗 基因组DNA 提取 |
Simple and Rapid Procedure for Isolation of High Quality Genomic DNA from Sugarcane |
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| Huang Dongliang,Qin Xiaoliang,Liao Qing,Gao Yijing,Fang Fengxue.Simple and Rapid Procedure for Isolation of High Quality Genomic DNA from Sugarcane[J].Biotechnology Bulletin,2010(5). | |
| Authors: | Huang Dongliang Qin Xiaoliang Liao Qing Gao Yijing Fang Fengxue |
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