利用基于GFP的FRET探针检测β-分泌酶的活性 |
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引用本文: | 陆锦玲,杨杰,储军,曾绍群,张智红.利用基于GFP的FRET探针检测β-分泌酶的活性[J].激光生物学报,2008,17(1):7-12. |
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作者姓名: | 陆锦玲 杨杰 储军 曾绍群 张智红 |
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作者单位: | 华中科技大学生物医学光子学教育部重点实验室,武汉光电国家实验室(筹)湖北,武汉,430074 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展“863”计划项目(2006AA020801),国家自然科学基金项目(90508003) |
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摘 要: | β淀粉样肽(amyloidβ-peptide,Aβ)在阿尔茨海默病(Alzheimeir’s disease,AD)患者脑内的异常产生和积累在AD的发病机理中扮演着重要的角色。β-分泌酶对淀粉样前体蛋白的裂解是Aβ产生的关键步骤,因此抑制β-分泌酶的活性成为AD药物治疗的一个重要策略。为了检测β-分泌酶的活性,应用基因工程技术将β-分泌酶作用底物序列(NFEV)的两端分别与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的颜色突变体--青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein,CFP)和黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)相连,构建了一个基于GFP的荧光能量共振转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)探针。荧光光谱分析结果显示,该荧光融合蛋白中CFP和YFP之间存在着较强的FRET。而当与β-分泌酶进行孵育后,FRET逐步降低,证明该探针能被β-分泌酶酶切。SDS-PAGE分析显示探针与β-分泌酶孵育后,荧光融合蛋白由60 kD大小逐渐变成30kD大小的蛋白,表明探针被β-分泌酶酶切成CFP和YFP分子,证实了荧光光谱的结果。这些结果表明,可通过检测探针的FRET效率方便地分析β-分泌酶的活性,为进一步筛选β-分泌酶的抑制剂提供了一个平台。
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关 键 词: | 阿尔茨海默病 β-分泌酶 荧光能量共振转移 绿色荧光蛋白 |
文章编号: | 1007-7146(2008)01-0007-06 |
收稿时间: | 2007-05-20 |
修稿时间: | 2007年5月20日 |
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