| 不同长度茎部shRNA表达载体构建与鉴定 |
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| 作者姓名： | 刘中华 乔宪凤 肖红卫 刘西梅 王华岩 郑新民 |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌,712100
2. 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室,武汉,430064 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 30671495),湖北省国际合作项目 (No. 2009BFA012),动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室开放课题 (No. 2010ZD103) 资助。 |
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| 摘 要： | 本研究针对同一目的基因设计构建不同茎部长度的shRNA表达载体,并对其在细胞及胚胎水平的干扰效应做一比较。以绿色荧光蛋白基因为沉默效应的靶基因,设计茎部长度分别为21bp、27bp、29bp的干扰片段,退火后连入带有H6启动子的真核表达载体psiSTRIKE中(分别命名为EGFP-21siRNA、EGFP-27siRNA和EGFP-29siRNA),将构建成功的载体以脂质体法转染小鼠胚胎成纤维细胞,利用荧光定量PCR对其荧光表达进行精确定量。不同茎部长度的shRNA载体均使绿色荧光蛋白基因表达降低,茎部为29bp时比21bp、27bp表现出更明显的沉默效应。细胞水平沉默效应的初步验证,为筛选适合小鼠个体水平的最佳发夹结构奠定了基础。
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| 关 键 词： | 基因沉默 shRNA 绿色荧光蛋白 小鼠 荧光定量PCR |
| 收稿时间： | 2009-10-07 |
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