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天花粉蛋白基因转化番茄的研究 总被引:19,自引:0,他引:19
核糖体失活蛋白(ribosomeinactivatingprotein,RIP)是一类作用于核糖体,抑制蛋白质合成的蛋白毒素,它具有广谱抗植物病毒和动物病毒的活性,在异种植物中的抗性效应尤其明显。迄今为止,人们已经从50多种植物中分离出60多种不... 相似文献
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天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)的一个亚型,neoTrichosanthin(n-TCS),及其突变体Y70An-TCS被克隆和表达为重组蛋白。用悬滴汽相扩散法得到n-TCS和Y70An-TCS的晶体。在MarResearch面探测器系统上分别收集了0.20nm和0.205nm分辨率的X射线衍射数据。用同晶差值傅立叶法解析了结构。最后晶体学R因子分别为0.183和0.184。键长的 相似文献
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培养了(E160A,E189A)TCS(天花粉蛋白)的单晶。用浸泡法得到了(E160A,E189A)TCS与Ade复合物的晶体。在MarResearch面探测器系统上分别收集了均为0.20nm分辨率的X射线衍射数据,数据处理用MarScale程序系统完成。用同晶差值Fourier法解析了(E160A,E189A)TCS和(E160A,E189A)TCS-Ade的晶体结构,结构修正利用X-PLOR程序.修正结果,晶体学R因子分别为0.180、0.184,键长和键角的RMS偏差分别为0.0012nm和2.566°、0.0012nm和2.622°。在(E160A,E189A)TCS-Ade中,Ade仍结合在N-糖苷酶活性口袋之中,它夹在Tyr70和Tyr111两个侧链环之间,与Tyr70环近乎平行。这一结果表明:TCS中的Glu160和Glu189同时突变成Ala,仍能与AMP发生N-糖苷酶反应.前文已经证明在(E160A)TCS中Glu189没有援救作用。目前,没有发现Glu189对TCS与AMP的直接作用,但Glu189与其它残基的协同作用及其在TCS与rRNA作用中扮演什么角色,尚待进一步研究。 相似文献
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Trichosanthin inhibits T cell activation by interfering with the recruitment of ZAP-70 to CD3 ζchain
INTRoDUCTIONThichosanthin(Tk),aplantproteinisolatedfromaChinesemedicinalherbTh-1.Correspondenceaddress:Dr.KuangYenCHoU,ShanghaiInstituteofImmunology,Shang-haiSecondMedicalUniversity28oSouthChongqingRoad,Shanghai2ooo25,China.Fax:(8621)63846383,E-mail:my@sh… 相似文献
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天花粉蛋白Y14F/R22L定点突变及其活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用多聚酶链式反应(PCR)技术,对天然天花粉蛋白(nTCS)基因在Tyr14和Arg22两个保守残基处同时进行定点突变,即Tyr14变成Phe,Arg22变成Leu,然后克隆到pET-8c高效表达载体上,构建成重组质粒pETY14F/R22L.经序列分析,定点突变的结果与预先设计的完全一致,突变后的天花粉蛋白命名为Y14F/R22LTCS.将pETY14F/R22L转化到E.coliBL21(DE3,pLysS)中,进行表达.经CM-SepharoseCL-6B柱纯化,SDS-PAGE鉴定,纯度可达90%.RIP活性测定显示,Y14F/R22LTCS的活性比nTCS降低了7.5倍,活性变化不显著,因此,TCS的Try14和Arg22对维持其活性部位构象并不是必需的.但由于Y14F/R22LTCS在E.coli中的表达量与nTCS相比明显下降,因此,Tyr14和Arg22可能与TCS翻译后的折叠有关. 相似文献
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Trichosanthin (TCS) possesses a broad spectrum of biological and pharmacological activities, including anti-cancer activities through apoptosis pathway. However, little is known about the effects of TCS on the cytoskeleton configuration and expression of actin and tubulin genes in Hela cell apoptosis. In the present study, apoptotic cytoskeleton structures were observed by confocal immunofluorescence microscopy, absolute amounts of actin and tubulin subunit mRNAs were determined by quantitative real-time PCR assays (QRT-PCR). Our results showed that the execution phase of cell apoptosis was a highly coordinated process of cellular reorganization, depolymerized microfilaments (MFs) accumulated in the coarsened cytoplasm and apoptotic bodies, followed by the formation of a ring microtubule (MT) structure beneath the plasma membrane. Importantly, apoptosis occurred by a suppression of actin and tubulin subunit gene expression. In particular, a rapid decrease in the amounts of gamma-actin mRNA preceded that of beta-actin; alpha- and beta-tubulin mRNAs were subsequently down-regulated in the later stage of Hela cell apoptosis. These results suggested that the execution of Hela cell apoptosis induced by TCS accompanied the specific changes of cytoskeleton configuration and, significantly, decreased the expression level of actin and tubulin subunit genes in different stages. 相似文献
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天花粉蛋白与FMP复合物的晶体结构 总被引:6,自引:1,他引:5
用浸泡法得到了天花粉蛋白(TCS)与FMP复合物的晶体,在SIMENNSX-200B面探测器系统上收集了一套2.0分辨率的X射线衍射数据。用同晶差值傅立叶法解析了复合物的结构,经X—PLOR程序修正得到了TCS—FMP复合物的分子结构并找出了197个水分子,最后的R因子为0.172,键长和键角的RMS偏差分别为0.015和2.922度。TCS—FMP复合物中,FMP与天花粉蛋白分子有较好的结合,其结合位置正处于根据三维结构和突变体信息推测的N一糖苷酶活性口袋之中。它的类嘌呤环夹在Y70和Y111两个侧链环之间,与Y70环近乎平行,其N7和N6分别与TCS分子的G1094羰基氧和I71的N成氢键,N3靠近R163的侧链,其磷酸根则伸向活性口袋的底部,与E189、E160和R163等残基作用。 相似文献
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用猴艾滋病D型逆转录病毒筛选抗艾滋病药物实验模型的建立及应用 总被引:3,自引:0,他引:3
以药物对合胞体形成的抑制和对细胞的毒性作为检测指标,应用猴艾滋病D型逆转录病毒(SRV)/Raji细胞系统建立了体外筛选抗艾滋病药物的实验模型。AZT和天花粉蛋白可显著地抑制SRV诱导的合胞体形成,它们的选择指数(SI)分别为数13500和8812。用该模型筛选了46种来源于天然资源的化合物,结果表明有11种天然化合物有明显的抗病毒活性。 相似文献
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