基于Desirability函数法对米根霉发酵制备富马酸的多目标优化

以富马酸产量和生产速率为目标，通过正交实验考察了种龄，接种量，葡萄糖和尿素浓度对两者的影响，进一步利用基于响应曲面方法的Desirability函数确定了葡萄糖和尿素的最佳浓度。结果表明，最佳的种龄和接种量分别为36h和15%，葡萄糖和尿素的优化浓度为132.73和0.0586g/l，此时模型预测的富马酸产量和生产速率达到71.42g/l和0.804g/(l.h)，Desirability的函数值高达0.966。该条件下在5L发酵罐水平上进行验证试验，经过88h的发酵最终生成富马酸66.5g/l，生产速率达到0.755 g/(l.h)，与未优化前相比，产量和生产速率分别提高了13.9%和15.8%，取得了理想的效果，实现了产量和生产速率的同时优化，为发酵法制备富马酸的工业化放大奠定了基础。     

英国生物技术产业的最新进展

英国政府始终对科研开发积极支持，仅2004年就计划在未来4年内投入1．34亿英镑，用于扩大临床试验药物的范围和数量。到2007年为止已达到34亿英镑。英国也是几大生物技术基金投资的理想国，2004年英国生物技术公司共获得5．13亿英镑的股权投资。     

GⅡ.17型诺如病毒多克隆抗体的制备及应用

目的制备兔抗GⅡ.17型诺如病毒(GⅡ.17norovirus,GⅡ.17 NoV)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)多克隆抗体(兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体),用其建立组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并对其进行初步应用。方法制备并纯化GⅡ.17 NoV VLPs,采用SDS-PAGE、电镜观察和粒径检测方法对其进行鉴定。将其免疫家兔制备兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,经Western blot对其进行鉴定,并用ELISA检测其效价及特异性。筛选与GⅡ.17 NoV VLPs结合力强的唾液HBGA受体类型,优化GⅡ.17NoV VLPs质量浓度及多克隆抗体稀释度,用兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体建立HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并进行特异性验证及初步应用。结果 GⅡ.17 NoV VLPs经检测纯度为95%,且颗粒形态完整,粒径均一。制备的多克隆抗体在Western blot可见特异性条带,效价可达1∶25 600 000,并对其他基因型(GⅠ.2、GⅠ.7、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.7)VLPs的交叉反应较弱。GⅡ.17 NoV VLPs和A、B、O和AB 4种血型的唾液HBGA均能结合,差异无统计学意义(P0.05);以GⅡ.17 NoV VLPs质量浓度为0.25μg/m L,多克隆抗体的稀释度为1∶160 000建立了HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并应用该方法对不同剂量GⅡ.17 NoV VLPs免疫的小鼠血清进行了半数阻断滴度检测。结论成功制备了高效价兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,建立了HBGA-GⅡ.17NoV VLPs阻断试验,且该方法特异性良好,可用于GⅡ.17 NoV VLPs免疫效果的评价。     

大流行流感疫苗血清学检测中马血球和鸡血球血凝抑制试验方法的比较

血凝抑制试验(HI)是评价季节性流感疫苗免疫效果的经典方法。由于对人、禽流感病毒的受体不同,不同来源的红血球检测敏感性可能有差异。实验中比较了经典的鸡血球HI方法和国外报道的马血球HI方法,发现两种方法在检测大流行流感疫苗接种者血清时,于不同毒株抗原检测时表现各不相同,检测结果差异在2倍之内,说明经典的鸡血球HI方法仍适用于评价大流行流感疫苗的免疫效果。     

小鼠腹膜透析模型的构建及腹膜转运关键蛋白的表达

目的构建小鼠腹膜透析模型,以腹膜平衡试验（PET）曲线描述其转运特征,并观察腹膜转运关键蛋白在小鼠腹膜的表达。方法以C57BL/6小鼠为动物模型,通过PET建立透析模型,分别进行生化测定描绘PET曲线,以及蛋白印迹进行关键蛋白的检测。结果C57BL/6小鼠的PET曲线图形与人类接近。AQP-1、eNOS、Cav-1在小鼠腹膜均有稳定的表达。结论该模型结果可靠,代表性强,适合推广。     

利用正交设计优化异色瓢虫SRAP-PCR反应体系

利用正交设计L16(45)对异色瓢虫Harmonia axyridis(Pallas)SRAP-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物)在4个水平上进行优化试验,试验结果用DPS和MINITAB软件进行分析,建立了异色瓢虫SRAP-PCR反应的最佳体系,即在20μL体系中模板50~100ng、引物0.25μmol/L、dNTPs0.1mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U、Mg2+0.375~0.625mmol/L。并对反应体系进行梯度退火试验,得到最佳退火温度为50.3℃。这一优化系统的建立,为今后利用SRAP技术进行瓢虫遗传图谱的构建、多态性分析和基因定位奠定了技术基础。     

二化螟人工饲料关键因子的优化及其优化配方的饲养效果

采用5因子4水平正交试验,将作者在以前筛选出的二化螟Chilosuppressalis(Walker)人工饲料的5个关键因子进行了进一步的优化,并得出了二化螟人工饲料的优化配方,其成分如下:稻茎粉18.75g、大豆粉15.00g、麦芽粉15.00g、稻糠粉6.25g、茭白茎粉7.50g、干酪素10.00g、酵母粉18.75g、纤维素7.50g、蔗糖15.00g、葡萄糖7.50g、维生素C7.50g、复合维生素B3.00g、胆固醇0.375g、氯化胆碱0.25g、Beck氏盐2.50g、山梨酸1.35g、琼脂13.49g和自来水809.25g。通过连续3代继代饲养试验,比较了该优化配方和二化螟天然饲料水稻茎的饲养效果。结果表明,在一些关键指标上(如存活率、化蛹率和羽化率等),所优化的二化螟人工饲料配方的饲养效果明显的好于其天然饲料水稻茎的;而在许多其它的指标上(如蛹期、成虫期、产卵量、卵期和孵化率等),该优化配方对二化螟的饲养效果与水稻茎的相当;但该配方饲养的二化螟在第3代时幼虫历期明显的比水稻茎的有所延长。     

小桐子ISSR-PCR体系的优化

采用正交试验设计方法.建立了小桐子ISSR-PCR反应体系和扩增程序.结果表明,在20μl反应体系中含有1×PCR缓冲液、200μmol/L dNTP、0.5μmol/L引物、2.0mmol/L MgCl2、0.5U Tag DNA聚合酶和90ng模板DNA最适用于小桐子ISSR-PCK扩增.适宜的扩增程序为94℃ 7min;94℃ 1min,44℃～56℃(退火温度随引物不同而定)45s,72℃ 1min,35个循环;72℃7min;4℃保存.