南海南沙海域沉积物中可培养微生物及其多样性分析

【目的】为了从南沙海域中分离获得微生物菌种资源，【方法】本文通过沉积物采样、可培养菌分离及16S rRNA鉴定，【结果】从22个站点的沉积物样品中获得349株细菌，分属于87个种。发现产芽孢细菌分布最广，并在10个站点的分离株中占多数；它们是Bacillus，Halobacillus，Brevibacillus，Paenibacillus，Pontibacillus和Thalassobacillus。其中芽孢杆菌（Bacillus）无论在数量上还是种类上都最多，分别属于34种，其中有8个可能的新种。此外，g-Proteobacteria是分离率较高的另一亚群；其中，假单胞菌（Pseudomonas），海杆菌（Marinobacter），食烷菌（Alcanivorax）属的细菌最多。统计还发现，在深度750~2000 m之间，低GC含量的细菌最丰富，而深度2000 m以下，分离株则全部为g-Proteobacteria。【结论】南沙沉积物可培养微生物中产芽孢细菌及 g-Proteobacteria比较丰富；其中，产芽孢细菌的多样性最高，具有进一步研究开发价值。     

豆科植物田著农杆菌转化的研究

本文报道一个简便的豆科植物田著的转化试验。田蓄子叶外值体能被含非致瘤性的Ti质"Y.载体 的根癌农杆菌感染。该载体带有一个嵌合的npr-II基因和胭脂碱合成酶基因。卡那霉素抗性愈伤组 织经胭脂碱测定、N P T-11酶活性检测和DNA分子杂交试验证明外源基因已导入了田蔷细抱。     

微生态治疗老年性阴道炎的临床观察

目的探讨采用乳杆菌活菌胶囊治疗老年性阴道炎的临床效果。方法将50例绝经妇女诊断为老年性阴道炎患者随机分成两组，研究组26例每晚清洁外阴后，阴道深部放置乳杆菌活菌胶囊500mg，连续10d。对照组24例每晚阴道内置人甲硝唑500mg，连续10d。两组均在停药后第3-7天复查比较其治愈率、总有效率。两组治愈者均于停药后90d复查，比较其复发率。结果研究组治愈率为73．07％，总有效率为96．14％。对照组治愈率为62．50％，总有效率为91．66％，两组差异无显著性（P〉0．05）。研究组复发率为0，对照组复发率为20．83％，两组差异有显著性（P〈0．05）。结论乳杆菌活菌阴道胶囊恢复阴道微生态平衡，增加阴道黏膜抵抗力。与抗生素药物比较复发率低，又无毒副作用，是治疗老年性阴道炎首进药物。     

禽流感抗原基因NA,HA的克隆及其表达载体的构建

HA和NA是禽流感病毒重要的保护性抗原基因,为了得到禽流感植物疫苗,本试验采用高保真PCR扩增方法得到目的基因,分别克隆到pMD18-T载体.经测序证实核酸序列正确后,克隆到含有GUS基因的高效植物双元表达载体pB1121上,获得含有HA/NA基因的植物双元表达载体pB1121-HA和pB1121-NA,采用冻融法将含HA/NA基因的植物双元表达载体转入根癌农杆菌LBA4404,菌液浸染生菜子叶,共培48小时后进行GUS基因表达检测,x-glue染色显蓝色,说明带有HA/NA的植物双元表达载体构建成功,为下一步的生菜转HA/NA基因研究奠定基础.     

一株产絮凝剂不动杆菌的筛选及其絮凝特性

从活性污泥中筛选出一株高效的微生物絮凝剂产生菌, 鉴定为鲍曼不动杆菌。蚕豆根尖细胞微核试验未显示该菌株所产絮凝剂具有遗传毒性。该菌产絮凝剂的最佳碳源和氮源分别为葡萄糖和酵母浸出汁, 培养时间为24 h。在絮凝体系中加入Ca2+能明显提高发酵液的絮凝率。在pH为8.0时对高岭土悬浊液和污水具有良好的絮凝效果。     

双歧杆菌表达系统的研究进展

双歧杆菌作为表达外源基因的宿主备受关注,成为近年来研究的热点。本文从双歧杆菌表达系统的组成、外源蛋白的表达等角度综述了近期的研究成果,对该系统在口服疫苗和抗肿瘤方面的研究及应用前景进行了展望。     

苏云金芽胞杆菌Rpp39杀虫晶体蛋白基因的鉴定及cry2Aa12基因的克隆表达

[目的]本研究的目的是分析从四川生态条件下分离的苏云金芽胞杆菌Rpp39菌株的特性,从分子水平上揭示该菌株对鳞翅目高毒力的原因;进一步从中分离克隆cry2Aa基因,并对其进行初步的表达研究.[方法]本研究主要采用扫描电镜观察、PCR-RFLP鉴定法和SDS-PAGE分析法研究菌株的特性;采用PCR直接克隆法克隆cry2Aa全长基因,并亚克隆到原核表达载体pET-30a中,构建重组表达质粒pET-2Aa,再转入受体菌E.coli.BL21(DE3)中进行诱导表达;采用室内生物测定法测定表达产物对小菜蛾和水稻二化螟的毒力.[结果]经扫描电镜观察菌株Rpp39主要产生菱形、方形和圆形3种伴胞晶体;SDS-PAGE分析表明主要产生130 kDa和60 kDa左右2种蛋白;经PCR-RFLP鉴定,该菌株含有cry1Aa、cry1Ab、cry1Ac、cry1Ia和cry2Aa五类杀虫晶体蛋白基因;1种cry2Aa类杀虫晶体蛋白全长基因被克隆,序列分析显示该基因的开放阅读框(ORF)为1902 bps,编码由634个氨基酸组成的蛋白质,氨基酸序列与Cry2Aa1蛋白同源性为99.7%,被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为cry2Aa12.重组表达质粒pET-2Aa在E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导能正常表达,SDS-PAGE电泳验证含有65 kDa表达蛋白.生物活性测定表明表达的包涵体蛋白对小菜蛾和二化螟具有杀虫活性,LC50分别为5.4 μg/mL和22.3μg/mL.[结论]菌株Rpp39及从中分离克隆的cry2Aa12基因来自四川生态条件,丰富了菌株及基因的资源,在资源积累方面具有重要意义.     

双歧杆菌对梗阻性黄疸大鼠肠道细菌移位影响的研究

目的观察梗阻性黄疸大鼠肠道细菌移位状况及经胃肠道给予双歧杆菌对肠道细菌移位的影响。方法Wistar大鼠30只随机分为3组：假手术组（SO组）、梗阻性黄疸组（OJ组）及双歧杆菌组。模型制备后第10天检测各组肝功能指标及血浆内毒素水平，取肝、脾、肠系膜淋巴结等肠道外器官组织行细菌培养，光镜观察末端回肠黏膜变化。结果 OJ组较SO组肝功能指标明显改变（P〈0．05），双歧杆菌组肝功能指标较OJ组改善。SO组血浆内毒素水平为（0．26±0．22）EU／ml，OJ组内毒素水平为（1．99±0．31）EU／ml，较SO组明显升高（P〈0．01），双歧杆菌组血浆内毒素水平为（0．74±0．20）EU／ml，较OJ组明显降低（P〈0．01）。OJ组肝、脾、肠系膜淋巴结中细菌移位率高于另两组，其中肠系膜淋巴结细菌移位率为90％，明显高于SO组及双歧杆菌组（P〈0．05）。光镜显示OJ组肠黏膜萎缩，绒毛水肿，部分上皮细胞脱落；双歧杆菌组肠黏膜上皮改变较OJ组明显减轻。结论梗阻性黄疸时出现明显的细菌移位与内毒素血症。应用微生态制剂可保护梗阻性黄疸时小肠黏膜屏障功能，减少肠源性细菌移位及内毒素血症的发生。