外切葡聚糖纤维二糖水解酶的分离纯化和部分性质研究

纤维素酶系包括内切葡聚糖酶,外切葡聚糖纤维二糖水解酶和葡萄糖昔酶三类酶．近年纤维素酶的结构与功能方面的研究有了很大进展[1～3]．目前,已有百余个不同菌种来源的纤维素酶的基因得到了克隆和表达,但主要为Trichodermareesei和Trichndermaviride产生的纤维素酶．TrichodemapseudokiningiiS-38是我们分离得到并易于培养的高产酶菌株[4]．我们采用固态发酵方法培养了该菌株,从发酵液中提纯了两个外切酶（cellobiohydrolase,EC3．21．91,CBH）组分,并测定了它们的部分酶学性质．1材料和方法1．1对硝基酚纤维二糖（P-nitrophenyl…     

色氨酸残基在内切葡聚糖酶分子中的作用

内切葡聚糖酶的化学修饰研究表明：色氨酸残基可能位于活性位点,与底物结合有关．荧光光谱测定指出该酶的荧光几乎都来自色氨酸残基,酶分子中色氨酸微环境对ｐＨ变化非常敏感,降低ｐＨ导致了酶分子构象发生了较大变化,配基结合使酶分子色氨酸微环境产生了改变,引发了与ｐＨ诱导不同的构象变化．     

用亲和层析技术分离纯化天冬氨酸酶

<正> 亲和层析技术做为现代生化实验室常用的提纯方法,具有专一性强,活力损失小,分离步骤少等优点。天冬氨酸酶是重要的酶制剂,以往见报的分离纯化工艺步骤繁琐,活力损失大。本文报道的新工艺是用聚乙二醇(PEG)/磷酸钾双水相抽提;DEAE-sophadex A-50柱层析除PEG和部分杂蛋白;环氧氯丙烷活化载体,底物作配基的亲和层析技术获得了电泳纯的天冬氨酸酶。     

内内葡聚糖苷水解酶的分离纯化和内源荧光性质

利用离子交换和分子筛层析技术从拟康氏木霉Ｓ－３８固态发酵液中提纯了两个内切葡聚糖苷酶组分。测定了一个组分的内源荧光性质。结果表明：该酶分子的内源荧光几乎都来自色氨酸。Ｎ－溴代琥珀酰亚胺（ＮＢＳ）修饰导致了酶活力的完全丧失,但是酶荧光残留了２５％,抑制剂纤维二糖与酶结合可使部分酶荧光得到保护,同时这种结合也可以保护一定的色氨酸荧光不被外来淬灭剂淬灭。     

内切葡聚糖苷水解酶的分离纯化和内源荧光性质

利用离子交换和分子筛层析技术从拟康氏木霉Ｓ－３８固态发酵液中提纯了两个内切葡聚糖苷酶组分．测定了一个组分的内源荧光性质,结果表明：该酶分子的内源荧光几乎都来自色氨酸．Ｎ－溴代琥珀酰亚胺（ＮＢＳ）修饰导致了酶活力的完全丧失,但是酶荧光残留了２５％,抑制剂纤维二糖与酶结合可使部分酶荧光得到保护,同时这种结合也可以保护一定的色氨酸荧光不被外来淬灭剂淬灭．     

纤维二糖抑制外切纤维素酶水解作用机理的分析

纤维二糖是纤维素分子的结构单元, 也是纤维素酶水解纤维素时的主要产物. 它能强烈抑制纤维素酶的水解作用, 但并不影响酶对纤维素的吸附. 红外、荧光、圆二色谱分析表明, 纤维二糖可结合在外切纤维素酶活性部位附近的色氨酸残基上形成“位阻效应”, 从而阻止纤维素分子链进入活性中心. 同时, 结合纤维二糖后, 外切纤维素酶分子构象发生了较大变化, 致使吸附纤维素后不能导致微纤维的分离, 为“无效吸附”.     

拟康氏木霉中内切葡聚糖苷水解酶的化学修饰

动力学研究揭示两个Ｐ来４．４和５．８的氨基酸残基可能对内切酶活性起重要作用,化学修饰研究结果表明一个羧基氨基酸对内切葡聚糖苷水解酶活力的必需的,且可能位地或接近酶的催化位点。     

拟康氏木霉中内切葡聚糖苷水解酶的化学修饰

动力学研究揭示两个pK值为4.4和5.8的氨基酸残基可能对内切酶活性起重要作用,化学修饰研究结果表明一个羧基氨基酸对内切葡聚糖苷水解酶活力为必需的,且可能位于或接近酶的催化位点．