顽拗植物澳洲坚果成熟叶片DNA提取方法比较

目的:针对澳洲坚果成熟叶片中富含多糖、多酚等杂质的特点,建立澳洲坚果成熟叶片中提取高质量 DNA 的方法.方法:采用改良CTAB法和改良SDS法提取澳洲坚果样品的总DNA,并对产物进行紫外、电泳及PCR扩增检测.结果:改良CrAB法的平均产率为13.6μg/g,略低于改良SDS法18.5μg/g,但改良CTAB法可有效去除多糖等杂质,获得的基因组DNA质量高.OD260/OD280均在1.7～1.9之间.进行ISSR扩增可获得清晰、多态性好的条带.结论:改良CrAB法较之改良SDS法更适合于从澳洲坚果成熟叶片中提取高质量DNA.     

番木瓜基因型遗传关系的SRAP分析

利用SRAP标记对中国22个番木瓜主要栽培品种（系）进行亲缘关系和遗传多样性研究。结果表明:（1）筛选出的20对SRAP引物共扩增249条谱带,其中多态性条带110条,多态性比率为43.20%,平均每对引物扩增的条带数和多态性条带数分别为12.45条和5.50条。（2）引物多态性信息含量（PIC）值变化范围为0.15～0.79,平均值为0.49。（3）聚类分析和主坐标分析显示,供试材料间的遗传相似系数为0.72～0.96,遗传多样性水平较低,在相似性系数为0.87时,可将所有试材分为3个类群。该研究结果有效地揭示了中国番木瓜主要栽培品种（系）资源的遗传背景和亲缘关系,可为番木瓜种质资源的分类、保护和有效利用以及新品种选育提供理论依据。     

番木瓜SCoT反应体系建立及引物筛选

采用单因素试验方法对番木瓜(Carica papaya L.) SCoT-PCR反应体系进行了优化,并对引物进行了筛选。结果表明,在20 μL番木瓜SCoT-PCR反应体系中,包含2.0 mmol/L Mg2+,0.3 mmol/L dNTPs,0.8 μmol/L引物,30 mg L-1模板DNA和1.0 U Taq聚合酶。运用该体系对不同引物和22个番木瓜品种进行验证,扩增的稳定性、可靠性良好,且分辨率较高,同时筛选出多态性丰富的5条引物和5对引物组合。因此,优化的番木瓜SCoT-PCR反应体系可用于种质鉴定和遗传多样性分析。     

广西野生桃金娘SRAP体系优化及建立北大核心CSCD

利用均匀设计方法优化了桃金娘SRAP反应体系。得出最佳反应体系,其总反应体积为25μL,包括2.5μL10×PCR buffer,1.0U Taq DNA聚合酶,20 ng模板DNA,0.2 mmol.L-1 dNTPs,0.3μmol.L-1引物,2.5 mmol.L-1Mg2+。采用优化的扩增体系,以Me1-Em11引物组合对8个参试种质进行SRAP扩增,扩增出的条带清晰、多态性好。所确立的体系稳定可靠,适于进行桃金娘的SRAP遗传分析。     

益智ISSR-PCR反应体系建立与优化

目的：获得适合的益智ISSR-PCR扩增反应体系。方法：利用正交设计L46（4^5）和单因素试验对益智ISSR-PCR反应体系的5因素（Taq酶,Mg^2＋,模板DNA．dNTPs,引物）在4个水平上进行优化试验,将二者所得结果进行综合比较分析。结果：最终扶得益智ISSR-PCR反应的最优体系（20μl）为：模板DNA 100ng,Mg^2＋ 3．0mmol／L,引物0．8μmol／L,dNTPs0．25mmol／L,Taq DNA聚合酶1．0U。最后,对益智ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火,得到最佳退火温度为50℃。结论：这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术研究分析益智遗传多样性奠定基础。     

澳洲坚果SCoT反应体系的建立及应用

为建立澳洲坚果(Macadamia spp.)的SCoT最适反应体系,用单因素设计方法对影响SCoT-PCR反应体系的主要影响因素进行了优化筛选,并构建了澳洲坚果种质的指纹图谱。结果表明,澳洲坚果的SCoT最适反应体系为:反应体系总体积为20μL,包含2.5 mmol L–1Mg2+,0.3 mmol L–1dNTPs,0.8μmol L–1引物,40 mg L–1模板DNA和1.0 U Taq DNA聚合酶。最适退火温度为50℃。该反应体系对澳洲坚果种质具有良好的稳定性、可靠性和较高的分辨率。选用多态性良好的单引物SC5和引物组合SC34+SC39,可以将12份澳洲坚果种质完全区分开,每份种质都各有独特的指纹图谱,置信概率达到99.988%。构建的SCoT反应体系可为澳洲坚果种质鉴定和遗传多样性分析等提供技术支持。