Zn-Fe LDHs改性石英砂生物膜体系对BDE-47的去除效果与机理

文章以四溴联苯醚(BDE-47)为目标污染物, 利用共沉淀法制备Zn-Fe LDHs覆膜改性石英砂基质, 在好氧、厌氧及两者交替条件下, 研究腐败希瓦氏菌CN32(Shewanella putrefaciens CN32) 在LDHs改性基质上生物膜形成过程及其对培养液中BDE-47的去除效果; 通过监测反应体系中Fe2+和H₂O₂浓度变化探讨BDE-47的生物及非生物去除机制。结果表明, LDHs改性不影响石英砂基质表面生物膜的形成, 但在好氧条件下, Zn-Fe LDHs石英砂改性基质对CN32电子传递链活性存在一定抑制作用, 而在厌氧条件下, LDHs改性会影响基质生物膜胞外聚合物(EPS)组成特性, 使多糖占比升高。无论在好氧还是厌氧条件下, 基质生物膜反应体系中EPS总浓度均显著高于纯菌CN32体系; 且在好氧与交替条件下, 基质生物膜的形成均显著提高反应体系中BDE-47的去除效果(约25%)。在交替条件下, 前3次循环(72h内)BDE-47的去除以基质吸附为主; 72h后, 生物膜吸附与生物降解共同发挥作用, 且LDHs改性基质在后期上升潜力更大。研究报道了LDHs改性基质生物膜形成特性及其对水相中PBDEs去除的潜力, 为强化人工湿地中PBDEs生物降解提供新思路。     

乐腹康胶囊的药敏试验

乐腹康胶囊系蜡样芽胞杆菌经培养收集活菌制成，本实验就乐腹康胶囊对３９种抗菌不进行药敏试验，并观察其敏感性在ＭＨ和普通琼脂培养基上的差异情况。发现乐腹康胶囊对多数抗菌素（共２４种）敏感，只对β－内酰胺类具有耐药性，并且其敏感性在两种培养基无明显差异。     

一种快速检测CLN6模型小鼠基因型的方法——高分辨率熔解曲线分析法

目的建立利用高分辨率熔解曲线（HRM）分析快速鉴定CLN6（神经元蜡样脂褐质沉积症,ceroid—lipofuscinosis,neurona16）小鼠（c2硒基因移码突变）基因型的方法。方法根据NCBI公布的小鼠cln6序列（NC00075）设计HRM引物和测序引物,然后采用HRM技术获得高分辨熔解曲线鉴定实验小鼠基因型,同时通过直接测序法进行验证,评价其灵敏性和准确性。结果181只实验小鼠经HRM检测,共有野生型11只、Cln6基因突变杂合子73只和纯合子97只,HRM结果和直接测序结果完全一致,准确性为100％。结论HRM方法检测DNA微小突变时具有操作简便、快速、灵敏,单管避免污染以及准确度高等优点,值得推广。     

外源基因转染山羊体细胞的整合效率研究

为了探讨影响山羊体细胞中外源基因整合效率的因素,采集胎羊和小羊皮肤并制备成纤维细胞,采用"Lipofectamine LTX"脂质体转染试剂包埋外源基因,分别导入上述细胞中,比较同一种外源基因载体(人凝血因子Ⅸ)转染至不同个体和类型的羊细胞,以及不同载体(人凝血因子Ⅸ、人转铁蛋白和牛催乳素)转染至同一个体羊细胞的整合效率的差异.通过药物筛选得到单细胞簇,经定量PCR计算外源基因的整合效率.同一种外源目的基因载体转染小羊成纤维细胞的整合效率显著高于胎羊成纤维细胞(P<0.05);而不同目的基因载体转染同一个体羊细胞,其细胞的整合效率与转染载体的片段大小有关.由此可知,小羊成纤维细胞外源基因整合频率优于胎羊细胞,且载体片段的大小影响外源基因转染的整合频率.     

中华眼镜蛇短链神经毒素cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

利用RT-PCR 技术从中华眼镜蛇毒腺组织中成功地克隆了短链神经毒素cDNA。测序结果表明,该基因开放阅读框架编码83个氨基酸残基,其中21个为信号肽,成熟肽为62个氨基酸残基。该基因与GenBank 报道的相同物种的神经毒素基因有相当的同源性,不同物种之间的信号肽序列十分保守。将短链神经毒素cDNA再经PCR扩增除去信号肽序列,克隆到pT7ZZ表达质粒中,转化E. coli BL21(DE3)后,经IPTG诱导可高效表达分子量为23kDa②左右的融合蛋白。表达产物占菌体总蛋白的25%左右。 Abstract:A novel short-chain neurotoxin cDNA was cloned from Chinese cobra venom by RT-PCR. The cDNA was cloned into the pGEM-T vector and sequenced. It has a ORF encoding 83 amino acid residues and a 21 residues signal peptide. This neurotoxin gene of Chinese cobra was highly homogeneous to the short-chain neurotoxin gene of similar species reported in GenBank. Among the genes of neurotoxin from different species, the signal peptides were very conserved. The cDNA encoding the mature peptide was amplified by PCR and was cloned into pT7ZZ vector. The recombinant vector was transformed into E. coliBL2(DE3). The E. coli highly expressed the fusion protein whose mollecular weight is 23kDa, after induced by 0.1 mol/L IPTG. The expressed protein was accumulated up to more than 25% of total bacterial protein.     

中国仓鼠卵细胞二氢叶酸还原酶基因在大肠杆菌中的高效表达

本工作采用PCR法将哺乳动物表达载体pSVA75上的中国仓鼠卵细胞(CHO)二氢叶酸还原酶基因扩增后插入到原核生物高效表达质料pBV221中,构建成胞内表达载体pDHFR-1,经转化大肠杆菌(E.coli DH5α)后获高效表达,表达量占总蛋白量的12.2%。利用这种方法不仅为深入研究该酶的结构和功能的关系及其新生肽链的折叠提供丰富的实验材料,而且也有希望成为较好的外源DNA原核扩增表达系统。 Abstract:The technique of PCR was used to amplify the Chinese Hamster Ovary DHFR gene in the mammal expression vector pSVA75,and the amplified fragments were inserted into the vector pBV221,to construct the vector pDHFR-1.The CHO dhfr was fransformaed into E.coli DH5α and high-level expressed.The scanning results(scanned by LKB Enhanced Laser Densitometer)showed that the expression level had reached 12.2% of the total cellular proteins.Therefore,this provides an abundant experimental material for studying the relationship between the protein construct and function,and for studying the biology of the nascent peptide chain during biosynthesis.This pathway may be a good expression system of prokaryocyte for amphifing eukaryotic gene.     

中华眼镜蛇短链神经毒素cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

利用RT－PCR技术从中华眼镜蛇毒腺组织中成功地克隆了短链神经毒素CDNA。测序结果表明,该基因开放阅读框架编码83个氨基酸残基,其中对个为信号肽,成熟肽为62个氨基酸残基。该基因与GenBank报道的相同物种的神经毒素基因有相当的同源性,不同物种之间的信号肽序列十分保守。将短链神经毒素CDNA再经PCR扩增除去信号肽序列,克隆到pT7ZZ表达质粒中,转化E.coliBL21（DE3）后,经IPTG诱导可高效表达分子量为23kDa②左右的融合蛋白。表达产物占菌体总蛋白的25％左右。     

牛绝对端粒长度测定及DNA提取造成的影响

目的：端粒是真核生物染色体末端的一种高度保守的负责维持染色体稳定的特殊结构,其DNA序列长度即端粒长度,会随着年龄增长或疾病发生发展而逐渐缩短,检测端粒长度可以为评估机体衰老和健康状况提供参考,但目前缺乏测定微量牛DNA样本绝对端粒长度的方法;通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)实现微量牛DNA样本绝对端粒长度的测定并评估DNA提取方法对牛绝对端粒长度测定结果的影响,为进行端粒长度研究时选择合适的DNA提取方法和端粒长度分析方法提供参考。方法：利用标准曲线对检测样本的端粒和内参Ct值进行转换,通过qPCR测定牛端粒长度绝对值;采用膜吸附法、苯酚-氯仿法和磁珠法3种方法分别提取相同样本的DNA,分别用端粒末端限制性片段(terminal restriction fragment, TRF)分析法和qPCR法分析端粒长度,比较不同DNA提取方法对牛绝对端粒长度测定的影响。结果：(1)qPCR可以测定纳克级别DNA样本的绝对端粒长度,检测结果重复性良好,并且和“金标准”TRF测定结果的相关性良好。(2)不同方法提取的DNA用TRF分析法和...