重组马g-干扰素抗病毒活性测定及单克隆抗体抑制活性鉴定

为了测定大肠杆菌和杆状病毒表达的重组马g-干扰素是否具有抗病毒活性, 利用这两种干扰素处理马胎肾细胞(EFK-78), 然后接种表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组水泡性口炎病毒(VSV*GFP), 观察干扰素对病毒表达GFP的抑制, 测出其抗病毒活性单位分别为1×103 AU/mL、1×105 AU/mL。评价了制备的九株抗重组马g-干扰素单克隆抗体是否可抑制重组马g-干扰素抗病毒活性, 证实其中一株可中和重组马g-干扰素的抗病毒活性。结果表明: 杆状病毒表达的马g-干扰素具有较高的抗病毒活性, 其活性可被一株制备的抗重组马g-干扰素单克隆抗体抑制; 首次获得原核表达的具有抗病毒活性的马g-干扰素。     

泛素基因介导下的猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因对小鼠的免疫试验

摘要：【目的】获得猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus, PRRSV）M蛋白基因及其与泛素（Ubiquitin, Ub）基因融合的真核表达质粒,并进一步研究Ub对M基因免疫效果的影响。【方法】利用RT-PCR技术以PRRSV CH-1a株和BALB/c小鼠脾脏组织总RNA为模板,分别扩增出PRRSV M蛋白基因与小鼠的Ub基因,利用SOE技术将PRRSV M基因与小鼠Ub基因进行融合,最终构建真核表达质粒pVAX1-M与pVAX1-U-M。以两种真核表达质粒DNA肌肉免疫BALB/c小鼠后,分别检测体液免疫反应与细胞免疫反应,比较M单基因与Ub-M融合基因DNA免疫所诱生的免疫应答强度【结果】IFA试验表明,pVAX1-M与pVAX1-U-M均能BHK-21细胞内成功表达目的基因;两种重组质粒免疫小鼠后均可诱生PRRSV ELISA抗体与细胞免疫反应,但是pVAX1-U-M诱导的细胞免疫反应明显高于pVAX1-M,差异显著（P<0.05）;而其诱导的抗体水平明显低于pVAX1-M,二者差异也显著（P<0.05）。【结论】泛素在一定程度上可以促进PRRSV M基因诱导细胞免疫反应,但对体液免疫未见到同样作用。     

PRAS40(Ser183)磷酸化多克隆抗体的制备及检测

PRAS40为富含脯氨酸、分子量为40kD的Akt底物蛋白,能够与雷怕霉素哺乳动物细胞靶点复合物1(mTORC1)结合,其苏氨酸183位点(Ser183)可被mTORC1磷酸化。为了制备PRAS40(Ser183)磷酸化多克隆抗体,本实验通过蛋白疏水性抗原性分析设计多肽抗原,用其免疫家兔获得抗血清,ELISA检测其效价为1:10000;Western blotting法检测发现,通过rProtein A Sepharose亲和层析纯化并经非磷酸化的抗原条吸附处理后的抗体可以明显提高磷酸化抗体的特异性;用PRAS40抗体及PRAS40(Ser183)磷酸化抗体对正常细胞HL7702、HEK293及肿瘤细胞HepG2、A549、S180的检测显示:磷酸化的Ser183在不同细胞中表达差异不显著,而在经细胞饥饿处理的HEK293细胞中却明显观察到了S183磷酸化水平随氨基酸含量降低而减弱的现象。因此,本实验所制备的抗体可用于PRAS40(Ser183)磷酸化位点的功能研究。     

环境因子对巴山冷杉-糙皮桦混交林物种分布及多样性的影响

对太白山巴山冷杉(Abies fargesii)-糙皮桦(Betula utilis)混交林及其环境因子进行了调查,采用CCA排序法分析了环境因子与物种分布的关系,偏CCA评估了各个环境因子的重要程度,GAM拟合了物种丰富度对各个环境因子的响应。结果显示,土壤pH、海拔、岩石盖度对物种分布有显著影响(P<0.05),其影响强度为:海拔>岩石盖度>pH,其它环境因子(土壤有机质、全N、全P含量和坡度)影响不显著(P>0.05)。GAM拟合结果表明,土壤pH、岩石盖度、海拔和全N含量是影响物种丰富度的主要环境因子(P<0.01),物种丰富度随pH值升高而增加,随岩石盖度和海拔升高而减小,而随全N含量的变化较为复杂;土壤有机质、全P含量和坡度对物种丰富度没有显著影响(P>0.05)。巴山冷杉-糙皮桦混交林物种分布及多样性是由海拔、岩石盖度和土壤pH值为主的多种环境因子综合作用的结果。     

利用CRISPR/Cas9系统构建FGF21基因敲除小鼠模型

成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors, FGFs)是细胞间的多功能信号分子,调节生物体的多种生理功能。FGF21作为一种重要的调控因子,对毛囊发育及生长周期具有重要作用。为研究FGF21基因对毛囊发育及生长周期的影响及作用机制,本研究通过构建靶向敲除FGF21基因的载体,体外将Cas9 mRNA和gRNA显微注射到FVB小鼠受精卵中,在小鼠FGF21基因的第1外显子上造成移码突变,从而获得FGF21基因敲除(knock out, KO)小鼠。通过测序鉴定F₀代小鼠基因型,共获得3只FGF21等位基因敲除小鼠(Fgf21 ^-/-);qRT-PCR和Western blotting结果表明,在Fgf21 ^-/-小鼠中未检测到FGF21 mRNA表达和FGF21蛋白表达;经脱毛再生及皮肤组织H&E染色发现,与野生型(wild type, WT)小鼠相比,Fgf21 ^-/-小鼠体重降低、器官组织未出现异常变化、毛发生长速度减慢、毛囊的直径和毛发的密度均减小。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了Fgf21 ^-/-小鼠模型,为后续研究FGF21基因在毛囊发育及生长周期中的功能提供了更好的动物模型。     

慢性鼻窦炎鼻内镜术后问卷评估分析

目的：探讨问卷随访对慢性鼻．鼻窦炎、鼻息肉患者鼻内镜术后疗效的评价意义。方法：采用Lurid-Machay的病人症状评分系统及鼻腔鼻窦结局测量20条（sino．nasaloutcometest-20,SNOT．20）中文版,对127例慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉术前、术后3个月、术后6个月患者进行相关问卷测试,并与100名进行健康入职体检者的相关问卷结果进行比较。结果：鼻内镜术后患者的主观症状在术后3个月较术前均明显改善,并在术后6个月时全面改善,差异均有统计学意义（P〈0．05）,但部分症状与健康受访者相比仍有差异。结论：问卷随访作为术后鼻部生理功能恢复的评估手段,有助于对术后疗效进行客观的综合评价。     

秦岭牛背梁自然保护区种子植物区系海拔梯度格局分析

通过植被调查并结合文献资料,分析了牛背梁自然保护区种子植物区系随海拔梯度的变化趋势,并利用聚类方法分析海拔梯度对区系成分构成的影响,探讨区系地理成分沿海拔梯度变化的断点,为植被垂直带谱划分提供区系依据.结果表明:(1)各类区系成分中,热带成分所占比例小且均随海拔上升而减小,海拔1 500 m是多数热带分布类型的上限;而温带成分总体随海拔梯度的升高而上升;热带成分与温带成分的比值随海拔升高呈下降趋势且始终小于1;中国特有属成分随海拔升高表现出了不同的变化趋势,在1 000～1 800 m海拔区间内变化不明显,但从1 800～2 880 m海拔区间内开始急剧下降;秦岭牛背梁自然保护区植物区系具有温带性质,不存在区系平衡点.(2)聚类分析结果显示,保护区植被沿海拔梯度可划分为5个垂直带谱:海拔1 000～2 000 m为中低山落叶阔叶林带;海拔2 000～2 500 m为中山落叶阔叶小叶林带;海拔2 500～2 600 m为亚高山寒温性针叶林带;海拔2 600～2 800 m为亚高山灌丛带;海拔2 800～2 900 m为亚高山草甸植被带.     

藻蓝蛋白亚基脂质体光动力作用对LKB1在乳腺癌细胞中表达的影响

为了探讨肿瘤抑制因子LKB1蛋白在肿瘤光动力疗法中作用,先用MTT法检测藻蓝蛋白亚基脂质体（PEG-PCS-Lip）对人乳腺癌细胞MCF-7,鼠乳腺癌细胞MA-782的光动力杀伤效果,分光光度法检测活性氧ROS的产量,Western blot检测LKB1激酶表达水平;然后用免疫组织化学方法观察PEG-PCS-Lip介导的光动力作用在乳腺癌模型鼠对LKB1基因表达影响. 结果显示在光照剂量为29.17 J/cm2时,用0~25 μg/mL PEG-PCS-Lip处理会小幅度促进MA-782和MCF-7细胞的生长,同时细胞中的ROS和LKB1蛋白的量下降;当用25~100 μg/mL PEG-PCS-Lip处理则明显抑制MA-782和MCF-7细胞的生长,同时细胞中的ROS和LKB1蛋白的量随PEG-PCS-Lip量的增加而增加.用10 mg/kg PEG-PCS-Lip静脉注射荷瘤小鼠,光照剂量为208.2 J/cm2时,其抑瘤率可达到68.9 %,LKB1在乳腺癌组织中的表达量则增加了33.9 %,同时,LKB1激酶从细胞核转移到细胞质的量也在增加. 因此,PEG-PCS-Lip PDT作用所产生的ROS可能是激活LKB1的表达的原因之一,二者协同作用在一定的光敏剂浓度范围内增强了PDT抑制肿瘤生长的疗效.     

酶法制备壳寡糖对番茄灰霉病病菌抑制机理初探

目的：研究酶降解法制备的壳寡糖对番茄灰霉病病菌的抑制机理。方法：测定壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝发育、孢子萌发的抑制作用以及对菌丝形态、细胞膜透性和对菌丝体可溶性蛋白质含量的影响。结果：当壳寡糖处理浓度为1.5mg/mL以上时,对菌丝生长的抑制率达70%以上,EC50为0.72mg/mL。当处理浓度为6mg/mL时,对分生孢子的抑制率显著优于其他浓度水平,达87.4%,EC50为1.48mg/mL。显微观察,浓度为0.8mg/mL的壳寡糖处理可诱导菌丝分枝增多、菌体分隔增加,分生孢子形成受到抑制。此外壳寡糖能够引起菌丝细胞膜透性发生变化,造成菌丝体内含物的渗漏。壳寡糖处理66 h后,菌丝体可溶性蛋白含量比对照降低了36.7%。结论：壳寡糖对番茄灰霉病病菌抑制机理的探究为研究壳寡糖这一新型生物农药的作用机制提供依据。     

林隙对太白山牛皮桦-巴山冷杉混交林内草本植物多样性的影响

采用CCA梯度排序和随机排列(random permutation)检验方法,分析了太白山牛皮桦-巴山冷杉混交林林隙内草本植物组成随林隙梯度变化的分布特征,以及个体数≥5的55种草本植物分布与凸度、坡度、土壤全N、全P、速效N、有效P、pH值和有机质8个林隙生境变量的关联性.结果表明:太白山牛皮桦-巴山冷杉混交林中,林隙面积占林分总面积的19.8%,林隙密度为20.7个.hm-2,其大小在25.6～279.1 m2,平均面积为93.7 m2.林隙面积扩大可以增加草本层物种丰富度,但林隙内69种草本植物中,大部分在所有林隙中都有分布,有8个物种仅出现在面积120 m2的大林隙,即草本植物的分布未呈现出沿林隙大小梯度连续变化的规律.个体数≥5的55种草本植物中,27.3%的物种与生境变量显著相关.林隙面积对物种丰富度的增加作用具有随机性.