肌球蛋白X干涉载体的构建与鉴定

肌球蛋白X(Myosin X,Myo X)是近年来发现的在细胞运动中发挥重要功能的非传统型肌球蛋白,但其发挥功能的分子机制目前尚不明确,RNA干扰技术是目前研究基因功能常用的方法。构建针对鼠的Myo X基因mRNA的shRNA真核表达载体,并转染NLT细胞,观察其对Myo X表达的抑制效应。结果显示,shRNA-2能够有效地降低Myo X的蛋白表达水平,而shRNA-1则不能。进一步分析显示,转染shRNA-2的NLT细胞丝状伪足的形成受到抑制,表明shRNA-2是能够抑制Myo X表达的干涉载体,此干涉载体的构建为进一步研究Myo X的新功能,揭示其作用的分子机制奠定基础。     

Netrin-1诱导促性腺素释放激素神经元迁移的研究

目的:建立神经导向研究的模型,并鉴定netrin-1的神经导向功能.方法:用促性腺素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone,GnRH)神经细胞为研究模型,建立双细胞团培养方法,用netrin-1诱导CmRH神经元亚克隆系NLT,观察细胞生长的诱导情况.结果:NLT细胞团在体外培养条件下,具有自发放射状迁移能力.在netrin-1诱导作用下,NLT细胞朝向netrin-1浓度梯度的方向生长,在靠近netrin-1细胞团的部位,netrin-1浓度梯度高,迁移出的细胞数目较多,约占总数目的68%,并且细胞迁移的平均距离较长为107.31μm;而在远离netrin-1细胞团部位,其netrin-1浓度梯度较低,迁移出的细胞数目相对较少约占32%,细胞迁移的平均距离较短为56.52μm.结论:netrin-1能诱导培养的NLT细胞发生明显的定向迁移,这为进一步深入研究netrin-1在神经系统中的功能和分子机制奠定了基础.     

Aβ42转基因AD果蝇的构建及在药物筛选中的运用

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种以β-淀粉样蛋白的形成和沉积为主要特征的神经退行性疾病,Aβ42被认为在AD的发病过程中起着重要的作用。果蝇是一种遗传操作简便的模式动物,利用果蝇中经典的Gal4／UAS系统,作者构建了在中枢神经系统中全神经元或运动神经元表达单拷贝或双拷贝AB42的转基因AD果蝇,并检验转基因果蝇在AD治疗药物筛选中的作用。结果显示,转基因AD果蝇寿命明显缩短且运动能力降低,而使用AD临床治疗药物安理申后,可延长AD果蝇寿命,改善AID果蝇的运动障碍。进一步的研究显示,δ阿片受体拮抗剂naltrindole给药后,也能缓解这些症状。该研究为AD治疗药物的初筛提供了一个经济便捷的工具。     

波摩那群昆明型钩端螺旋体的鉴定

K5株钩端螺旋体系1960年自昆明市郊高山姬鼠(Apodemus chevrieri)肾分离获得,经多次鉴定均属波摩那群新型,建议命名为昆明型钩端螺旋体(Leptospira interrogans serovarkuming)。     

致病性钩端螺旋体的三个新血清型

自云南省分离出3株(M48、A31、A82)钩端螺旋体,经鉴定它们分别属于3个新血清型。M48系1960年从耿马县猪肾分离,A31与A82分别于1962、1970年自勐腊县病人血培养物中分离。拟分别命名为耿马型(M48)、版纳型(A31)和勐捧型(A82)钩端螺旋体[Leptospirainterrogans serovars gengma (M48),banna (A3I)和mengpeng (A82)]。其中耿马型应属于塔拉索夫血清群;版纳型和勐捧型的血清学性质界于塔拉索夫和歇尔曼二群之间,其血清学归属尚难肯定。     

肌球蛋白X在细胞运动中的作用

肌球蛋白X(myosin X,Myo X)是一类尾部具有MyTH4(myosin tail homology 4,MyTH4)和FERM(band4.1/ezrin/radixin/moesin,FERM)结构域的非传统型肌球蛋白,广泛分布于脊椎动物细胞中.近几年的研究表明,Myo X尾部结构域能够与众多的信号分子相互作用,参与调节从丝状伪足形成到胞质分裂等多种细胞运动过程,但其具体的调控机制目前尚不完全清楚.Myo X作为一类连接细胞膜与细胞骨架的动力蛋白分子,它的研究越来越受到人们的关注,其功能的揭示将为进一步阐明细胞多种运动机制提供理论依据.     

唐鱼养殖种群与广州附近4个野生种群的遗传关系

唐鱼(Tanichthys albonubes)是为数不多的几种原产中国的世界性观赏鱼类之一。自2003年以来, 多个唐鱼野生种群相继被发现, 其濒危状态和等级由野外灭绝降为极危。为研究唐鱼养殖种群与广州附近野生种群之间的遗传关系, 本文分析了唐鱼3个代表性养殖种群和4个野生种群, 共计186个样本的Cyt b基因、2个核基因(ENC1和RAG1)以及13个微卫星位点数据。基于K2P模型的遗传距离结果显示, 唐鱼野生种群间的遗传距离在0.005-0.015之间, 养殖种群间的遗传距离为0.001-0.009。系统发育分析表明, 唐鱼养殖种群包含4个单倍型谱系分支, 其中2个分别与广州附近2个野生种群聚在一起, 另外2个分别独立成支。单倍型网络亲缘关系分析显示, 清远种群只有1个单倍型且与芳村养殖种群共享, 芳村养殖种群拥有最多的单倍型。基于微卫星数据的STRUCTURE分析表明, 所有种群最佳分簇数为2, 清远种群与养殖种群聚为一簇, 良口和石门种群聚为另一簇。主成分分析结果显示, 养殖种群高度重叠并能与野生种群分开, 清远种群与养殖种群存在部分重叠。利用IMa3的基因流分析表明, 存在清远种群至芳村养殖种群的单向基因流。综合本文结果, 作者认为唐鱼养殖种群应起源于广州附近多个野生种群。清远种群来源于养殖种群中的芳村养殖种群。建议在未来唐鱼的保护策略中, 应禁止不规范的放流活动并且禁止将不同野生种群补充至养殖种群, 同时加强唐鱼养殖种群和野生种群的遗传资源管理和持续监测。     

超声波萃取烟叶中3-磷酸甘油脱氢酶的研究

将超声波萃取手段引入到烟叶中3-磷酸甘油脱氢酶提取方法中,并通过正交实验确定了超声波萃取烟叶中3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的最佳条件为：超声波破碎功率为75w,超声波破碎间歇时间为2s,超声波破碎时间为3s,料液比为1:15g/mL;在此最佳条件下测得烟叶中3-磷酸甘油脱氢酶为0.3937U/mg蛋白,均比其他提取手段的酶活要高。     

婆婆纳抗黑色素瘤物质基础的初步研究

为明确婆婆纳（Veronica didyma）抗黑色素瘤活性部位及物质基础，该研究采用CCK8法评价了婆婆纳乙醇提取物4个萃取部位（石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层、水层）乙醇提取物及单体化合物对黑色素瘤细胞株（B16和A375）细胞的增殖抑制作用，并使用植物化学方法和技术对活性部位的化学成分进行系统分离纯化。结果表明：（1）乙酸乙酯萃取部位（ethyl acetate extract,PPNE）较其他样品有更好抑制B16细胞和A375细胞增殖的作用，其半抑制浓度（IC50）值分别为0.177 mg·mL-1(B16)、2.826 mg·mL-1(A375)。（2）从活性部位PPNE中得到7个单体化合物，即对羟基苯甲醛（1）、胡黄连苷II(2)、isoscutellarein 7-O-(6?-oacetyl)-β-allopyranosyl (1?→2″)-β-glucopyranoside(3)、3′-hydroxyl-4′-O-methylisoscutellarein 7-O-[6?-O-acetyl-β-D-allopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranos...