基因多态性与药物的效能

长期以来,人们就认识到不同的个体对同一种药物的反应存在着差异,这直接影响着药物的疗效和不良反应。本文从药物代谢基因、药物受体相关基因、药物转运基因和疾病通路基因等方面论述了基因多态性与药物效能的关系。有关这方面的研究,为开发安全、有效的药物,指导临床个性化合理用药,减少毒、副作用,提供了新的思路。     

产适冷木聚糖酶的海洋产青霉的筛选和诱变

从黄海深层海底泥样中分离到1株产低温木聚糖酶的青霉,经EMS诱变得到11株酶活性提高的菌株,对其中1株产低温木聚糖酶活力最高的菌株产酶性质进行了初步研究。所产木聚糖酶在pH4．6,45℃时酶活可达25．8u／ml,比出发菌株提高126％。诱变后菌株所产木聚糖酶在0℃仍有显著酶活性,达8．2u／ml。     

丝状真菌瑞氏木霉外源基因表达系统的构建

采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,体外扩增了带有潮霉素磷酸转移酶(hph)基因的DNA片段 ,将hph插入pTRIL的cbh1启动子和终止子序列之间 ,构建了Pcbh1 hph Tcbh1表达盒 .用此表达盒转化瑞氏木霉C30原生质体 ,在潮霉素平板上得到 1 5株抗性转化子 .对其中的H1转化子进行了PCR和Southern印迹分析 ,证实hph基因确实整合到转化子染色体DNA上 ,并在Pcbh1 启动子控制下进行高效表达 .转化子H1对潮霉素抗性达 1 5 0mg L ,比出发菌株提高 2倍 .瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL的构建成功为开展瑞氏木霉分子生物学研究以及进一步的工程菌株构建工作奠定了基础     

瑞氏木霉木糖醇脱氢酶基因的分离与鉴定

将在木聚糖上生长的瑞氏木霉(Trichoderma reesei)RutC-30的cDNA文库全部质粒转化已携带有毕赤氏酵(Pithia stipitis)木糖还原酶基因的重组酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)菌株H475,在H475中构建了瑞氏木霉的cDNA表达亚文库。在以木糖为唯一碳源的选择性酵母合成培养基上,从该亚文库中筛选到瑞氏木霉木糖醇脱氢酶cDNA基因．该基因片段长为1．3kb。Southern、Norhern印迹杂交分析和蛋白质凝胶电泳结果表明该基因确实来源于瑞氏木霉,所编码蛋白质分子量约为40kDa。携带有毕赤氏酵母木糖还原酶和瑞氏木霉木糖醇脱氢酶基因的重组酵母能够在以木糖为唯一碳源的培养基上生长,并能将90％以上的木糖转化为木糖醇、乙醇和其它副产品。     

瑞氏木霉外源基因表达系统中受体菌株的改造

将解除了葡萄糖阻遏的纤维素酶高产菌株瑞氏木霉TrichodermareeseiRutC30经EMS诱变后,在酪蛋白平板上筛选出部分蛋白酶缺陷突变菌株T.reeseiRutC30M3。RutC30M3的胞外蛋白酶活力比亲本株降低约74%,但生长特性、产纤维素酶活力等性状与亲本株相同。用携带潮霉素磷酸转移酶基因(hph)的表达质粒pAN7-1分别转化瑞氏木霉RutC30和RutC30M3原生质体,转化结果显示RutC30M3(pAN7-1)对潮霉素的抗性比RutC30(pAN7-1)提高约20%,而Northernblot分析结果显示在两菌株中潮霉素基因转录水平相似,由此证明宿主菌蛋白酶缺陷对保护重组蛋白免于降解有明显作用。蛋白酶缺陷菌株RutC30M3适于作为瑞氏木霉外源基因表达系统中的受体菌株用于大量生产同源与异源蛋白。     

丝状真菌细胞凋亡研究方法

<正>细胞凋亡作为细胞调控机制之一,与细胞增殖、细胞分化同等重要,在进化上具有保守性。细胞周期和凋亡通路的失调能引发多种人类疾病,是目前生命科学领域活跃的研究方向(Gougeon 2003;Brown&Attardi 2005)。由于丝状真菌细胞凋亡的表型和生理     

丝状真菌细胞凋亡研究进展

细胞凋亡是真核生物中保守而重要的细胞死亡机制,与癌症、艾滋病等多种疾病密切相关.与酵母菌这一细胞凋亡模式生物相比,丝状真菌凋亡研究起步较晚但具有其独特的优势.近年来丝状真菌细胞凋亡的内外源诱因、细胞凋亡的特征以及信号传导通路等方面的研究进展迅速.丝状真菌,尤其是构巢曲霉和烟曲霉有望成为细胞凋亡研究新的模式物种.此外,研究丝状真菌细胞凋亡现象在农业和医疗领域也具有重要的应用价值,可为生物防治和人类真菌病的治疗提供新的思路.工业丝状真菌细胞凋亡研究有助于构建性状更加优良的工程菌株.     

适冷海洋细菌交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)MB-1内切葡聚糖酶基因的克隆和表达

从黄海深海海底淤泥中筛选出一株产纤维素酶的适冷革兰氏阴性杆菌MB 1,克隆和分析了MB 1的 16SrDNA序列 (GenBank接受号 :AY5 5 132 1) ,经鉴定为交替假单胞菌 (Pseudoalteromonas) ,命名为Pseudoalteromonassp .MB 1。克隆了该菌适冷内切葡聚糖酶基因celA(GenBank接受号 :AY5 5 132 2 ) ,并在大肠杆菌 (Escherichiacoli)BL2 1中进行了表达。重组E .coli菌体破碎后 ,获取上清液 ,其中融合蛋白GST CelA浓度约为 78 5mg L。分析了融合酶GST CelA的性质 ,其最适反应温度为 35℃ ,最适反应pH值为 7 2 ,为中性适冷酶。实验结果为交替假单胞菌低温纤维素酶的基础理论和应用研究奠定了基础     

氯化苄法提取染色体DNA

本文介绍了一种简便、快速提取细菌和真菌的基因组DNA的方法一氯化苄法。使用氯化苄法抽提基因组DNA,不仅具有快迅、简便、耗资少的优点;而且得到的基因组DNA纯度高,质量好,可直接用于酶切、杂交和PCR扩增等用途。该法可用于多种细菌和真菌基因组DNA的提取。     

简便易行的丝状真菌染色体DNA提取法

近二十年来,丝状真菌分子生物学研究进展迅速, 尤其对丝状真菌的遗传转化、基因克隆和表达系统等已有多篇文献发表（唐国敏,1992）。随着AFLP、RFLP、RAPD-PCR等DNA分子标记新技术的发展,以及这些新技术在丝状真菌遗传多样性研究、遗传图谱构建、种系指纹图谱制和鉴定等工作中应用的日益广泛,发展简便易行的丝状真菌高质量染色体DNA提取方法无疑将对上述工作提供便利。 丝状真菌的细胞壁含有复杂的多糖物质,菌丝通常产色素,因此常常导致制备的染色体DNA样品中带有不同数量的多糖、色素以及成分不明的胞壁物质。这些物质的…