SHIV-XJ02170感染恒河猴后期的传代特点和env基因变异

目的研究SHIV-XJ02170在中国恒河猴感染后期传代过程中病毒和宿主的变化特点,并分析env基因的序列变异。方法将感染中国恒河猴G0401V后期（5年）的SHIV-XJ02170病毒垂直传代2只猴（G0401V→G0402V→0403V）,同时,剔除G0401V猴CD8＋T细胞使潜伏的病毒大量复制后传代1只猴（G0401V→G0404V）,应用流式细胞术、病毒载量测定、序列分析等方法研究该病毒在猴体内长期适应后的病毒和免疫学指标及序列变异特点。结果 G0401V在感染后期仍能稳定传代,且表现出毒力增强的特点。其传代猴G0402V在传代后41 d死亡,外周血CD4＋T淋巴细胞衰竭,仅为43个/mL,符合艾滋病感染猴快速进展型的特征。剔除体内CD8＋T细胞之后的传代猴G0404V的表现类似G0401V,即长期低水平的病毒血症水平。env基因序列分析发现SHIV-XJ02170在G0401V体内长期适应后发生了可遗传的序列变异,并引起糖基化位点的改变。结论 SHIV-XJ02170在猴体长期适应后的传代过程中表现出向强毒株过渡的特征,为进行SHIV-XJ02170感染性克隆的构建奠定了良好的实验基础。     

SHIV病毒在猴体内的复制与传代

目的为建立SHIV艾滋病动物模型提供毒力较强的病毒株,将新合成的SHIV XJ02170病毒适应猴体,并增强其毒力。方法实验前采集猴血清并进行血清学检查和PCR检测。选出13只无SIV,STLV1,SRV D和B病毒感染的猴。第一批实验,将SHIV前病毒DNA质粒经肌肉注射到猴体内,每只500μg;SHIV病毒液,经静脉注射到猴体内,每只2ml。病毒质粒和病毒液各接种2只猴。当第一批猴体检出病毒后,10ml感染猴的全血,抗凝后静脉注射到第二批猴体内,当第二批猴检出病毒后再将10ml感染猴的全血静脉注射到第三批猴体内,连续传代4次。每批实验均定期采集血液标本,分别用肝素和EDTA抗凝,进行病毒分离;病毒基因PCR检测;CD4,CD8测定;病毒抗体检测。结果SHIV XJ02170病毒和SHIV XJ02170前病毒DNA质粒在猴体内的传代中均能分离出病毒;从传代猴的血浆和外周血单核细胞(PBMC)中检出了病毒DNA和RNA基因;CD4,CD8测定结果显示有暂时性倒置现象,后变为正常倒置与正常交替出现;在传代的猴血清中检测出特异性HIV病毒抗体。结论SHIV XJ02170病毒与SHIV XJ02170前病毒DNA质粒,均能在恒河猴体内复制。     

SHIV及其在AIDS疫苗和药物研究中的应用

艾滋病已成为21世纪威胁人类健康的最主要的疾病,最有效的预防措施,就是研制安全有效的疫苗.疫苗安全性和有效性评价,以及疫苗组合的选择和免疫程序的策略,需要在合适的动物模型中进行分析.SIV/恒河猴模型曾被认为是最有效的研究模型.但是,SIV和HIV之间基因的差异,使得这个模型存在很大局限性.研究人员还曾经致力于HIV-1/黑猩猩模型,但伦理学等方面的问题导致该模型也不能被广泛利用[1].     

改变食物组成对大鼠胃肠道嗜铬细胞的影响

为研究食物组成对肠嗜铬（ＥＣ）细胞的影响，用免疫组织化学方法（ＰＡＰ法）对４组食物组成不同大鼠的胃肠道５－羟色胺免疫反应阳性（５－ＨＴＩＲ）细胞的数量和分布作了观察。发现食物改变会引起大鼠摄食量和胃肠形态的变化，但未见其生长发育异常。食物中米糠含量加倍后，大鼠５－ＨＴＩＲ细胞数量无显著增加，但分布型有明显的变化。食物中米糠含量或米糠和麦麸含量都减少到１０％后，大鼠５－ＨＴＩＲ细胞数量和分布都有明显     

大熊猫胃肠道内分泌细胞分布型的研究

本文用ＰＡＰ法对３只大熊猫胃底,幽门腺区、十二脂肠,空肠,回肠、结肠和直肠的五羟色胺,生长抑素,胃素,胆囊收缩囊,神经降压素、胃动素、抑胃多肽、胰高血糖素、血管活性肠肽和内啡肽的ＩＲ细胞进行了研究。结果表明,大熊猫胃肠道粘膜上皮中具有前八种ＩＲ细胞。对７年龄个体胃肠各段相对数量的比较和各段内分布情况的观察结果表明,除五羟色胺ＩＲ细胞在空肠分布较多外,大多数种类的ＩＲ细胞集中分布于幽门区和十二指肠,     

中华竹鼠胃肠道内分泌细胞分布型的研究

本文用免疫组织化学方法（ＰＡＰ法）对１０种ＧＩＥＣ在中华竹鼠（Ｒｈｉｚｏｍｙｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）１５个胃肠段中的分布作了观察和统计分析,以探讨中华竹鼠胃肠内分泌细胞与其特殊食性的适应关系．结果表明：中华竹鼠胃肠中可能至少有７种免疫反应活性内分泌细胞。与大熊猫相比,尽管都以竹类为主食,但由于取食行为不同,它们ＧＩＥＣ的分布型不尽相同．这些结果从一定程度上表明ＧＩＥＣ的分布不仅与食物组成相关。也可能与取食行为有关。     

中国恒河猴Mamu-A*01基因筛查及其对抗原肽p11C的特异性CTL反应

目的 筛查中国恒河猴Mamu-A*01基因,比较中国恒河猴和印度恒河猴的Mamu-A*01基因序列和功能是否相同.方法 PCR方法检测128只中国恒河猴,用特异性引物扩增Mamu-A*01基因,将PCR扩增后的产物克隆测序后与印度恒河猴的Mamu-A*01基因进行同源比对;酶联免疫斑点检测 (ELISPOT) 方法分别检测5只Mamu-A*01基因阳性和5只阴性恒河猴针对SIV、SHIV抗原肽p11C的特异性CTL反应.结果 共筛查出5 只Mamu-A*01基因阳性恒河猴 (3.91%),经测序分析后与印度恒河猴的同源性可达99.1 %.这5只均为SIV/SHIV感染恒河猴,其中四只SIV感染的猴的ELISPOT结果显示针对p11C的高频CTL反应,斑点数在500-1400/106 PBMCs之间,而另1只SHIV感染的恒河猴及5只阴性猴没有斑点出现.结论 中国恒河猴含有Mamu-A*01基因,基因频率有区域性差异,中国恒河猴的Mamu-A*01可提呈特异性抗原肽p11C.     

云南地区恒河猴MHC部分基因频率及多态性的分析

目的不同种群恒河猴（Macaca mulatta）主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）基因的差异性,很大程度上影响了用其作为动物模型的实验研究结果的稳定性、可靠性和可重复性。清晰了解云南地区恒河猴种群免疫遗传学背景对于运用该种群开展各项研究非常重要。恒河猴基因Mamu（Macaca mulatta）-A＊01就被公认与猴免疫缺陷病毒（SIV）的感染与延缓病程相联系。Mamu-Ⅱ类等位基因Mamu-DRB1＊0306、0309有研究表明也与SIV感染后的病程发展有关。方法针对目前研究热点的Mamu-A＊01基因及Ⅱ类Mamu-DRB1＊0306、0309基因,采用序列特异性引物-聚合酶链式反应方法（PCR-SSP）,对云南地区的140只恒河猴（其中92只来源于云南景东野外自然繁殖群、48只来源于本灵长类中心自繁群）进行检测。并对阳性样本用部分测序结合单链构象多态性分析（SSCP）的方法加以验证。结果Mamu-A＊01检测结果为阴性。Mamu-DRB1＊0306、0309基因频率分别为32%及45%。结论初步显示云南地区恒河猴种群Mamu-A＊01基因可能缺失或基因频率很低,但存在Mamu-DRB1＊0306、0309基因。初步证明SSCP方法代替大规模测序是可行的,为云南地区恒河猴在AIDS研究中的应用提供了部分依据,一定程度上填补了该种群的遗传背景资料。     

滇金丝猴,藏酋猴和毛耳猴下颌骨的异速生长

本文对滇金丝猴(Rhinopithecus bieti)、藏酋猴(Macaca thibetana)和毛耳猴(Macacamulatta lasiota)下颌骨的33项指标进行了测量.经分析,下颌骨的生长存在有部位间、左右间及类群间的差异。表明这些动物下颌骨形态因适应某种生态环境而可能存在某些相似性,但因其食物性质、取食行为、系统及个体发育过程中存在差异而出现不同的生长模式。