东亚砂藓(Rhacomitrum canescens)RNA提取方法的比较和改进

方法:以东亚砂藓为材料,用CTAB法、热硼酸盐法和改良的SDS/酸酚法提取东亚砂藓总RNA,并采用3种方法进行沉淀,从提取RNA的纯度、完整性、产量、耗时和RT-PCR效果等分析确定适用于东亚砂藓总RNA提取的方法。结果:研究表明:CTAB法提取的RNA 28S rRNA明显缺失,泳道模糊不清,杂质多,热硼酸法和改良的SDS/酸酚法提取RNA 28S rRNA,18S rRNA条带清晰,OD260/OD280都在1.7以上,纯度高,但热硼酸法提取出的RNA有DNA污染,RNA的含量(15.68~35.2μg.g-1)低于SDS/酸酚法提取RNA的含量(46.5~51.9μg.g-1)3种沉淀方法比较认为无水乙醇配合LiCl沉淀RNA节省时间,反转录和RT-PCR效果好。结论:改良的SDS/酸酚法适合东亚砂藓RNA的提取。     

麻花秦艽种子休眠机理及其破除方法

通过对干燥贮藏后熟麻花秦艽种子透水性和粗提物活性的测定以及采用高锰酸钾、赤霉素、青霉素、硫酸、流水浸泡方法进行发芽试验,探讨了种子休眠机理和破除休眠的技术。结果表明:麻花秦艽种子吸水过程符合Logistic曲线,其种皮对种子吸水无阻碍作用;硫酸和高锰酸钾处理极显著提高了麻花秦艽种子的发芽率(P<0.01),说明种皮机械障碍是种子萌发的因素之一。种子粗提物在浓度为0.02—0.2 g/mL时具有很强的抑制活性,均对小麦、白菜和麻花秦艽种子萌发和生长产生抑制作用以及流水浸泡可以提高麻花秦艽种子发芽率,表明种子内源抑制物是影响其休眠的另一因素。不同处理均打破了种子休眠,显著提高了种子发芽率,其中1.5%高锰酸钾浸泡10 min光照培养下种子发芽率及发芽势、发芽指数和活力指数均显著高于其他处理(P<0.05)。相比对照,1.5%高锰酸钾处理的种子发芽率极显著提高106.9%。经1.5%高锰酸钾浸泡10 min的麻花秦艽种子粗提物对白菜种子萌发的抑制作用低于未处理,以浓度为0.02—0.04 g/mL时抑制显著,说明高锰酸钾可减弱麻花秦艽种子内源抑制物的活性。综上所述,麻花秦艽种子的休眠属综合休眠。