单域抗体与力达霉素的基因工程强化融合蛋白VL-LDP-AE的制备及其抗肿瘤作用

Ⅳ型胶原酶与肿瘤的侵袭、转移及新血管生成等过程密切相关. 单域抗体作为肿瘤靶向性载体有许多传统抗体所无法比拟的优势. 以Ⅳ型胶原酶为靶点, 以单域抗体为载体, 以强效烯二炔抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)为“弹头”, 采用DNA 重组与分子组装相结合的新方法, 制备抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11的轻链可变区单域抗体VL与LDM的基因工程强化融合蛋白VL-LDP-AE. MTT结果表明, VL-LDP-AE对体外培养的肿瘤细胞有强烈杀伤作用, 对HT-1080细胞和KB细胞的IC50值分别为8.55×10-12和1.70×10-11 mol/L. VL-LDP-AE还可抑制鸡胚尿囊膜新生血管的生成并可破坏人脐静脉内皮细胞(HUVEC)形成内皮小管. 动物实验观察对小鼠移植性肝癌22(H22)的疗效. 皮下接种肿瘤, 72 h后开始给药(分别在接种后第3和第10天静脉注射2次). 以最大耐受剂量进行比较, VL-LDP-AE 0.375 mg/kg的抑瘤率为89.5%, LDM 0.05 mg/kg组的抑瘤率为69.9%, 丝裂霉素(MMC)1 mg/kg组的抑瘤率为35%. VL-LDP-AE的分子量为25.4 kD, 远小于其他形式的抗体药物分子. 作为小型、高效的抗体药物, VL-LDP-AE在肿瘤靶向治疗中有良好应用前景. 此外, 其独特的制备方法还可作为制备新型抗肿瘤抗体靶向药物的技术平台     

以Ⅳ型胶原酶为靶点的小型化单抗免疫偶联物的抗肿瘤作用

Ⅳ型胶原酶与肿瘤的侵袭、转移以及新血管生成等过程密切相关. 以Ⅳ型胶原酶为分子靶点, 利用小鼠抗Ⅳ型胶原酶单抗构建了小型化的Fab'片段与高效抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)的免疫偶联物 (Fab'-LDM). 偶联物的分子量约为65 kD, 偶联分子比为1︰1. 以ELISA方法检测, Fab'-LDM偶联物保留了单抗Fab′片段对肝癌22(H22)细胞的免疫结合活性; 以MTT法测定, Fab'-LDM偶联物对肝癌22细胞显示出更强的细胞毒性. 动物体内试验观察对小鼠移植性肝癌22的疗效, 小鼠皮下接种肿瘤, 24 h后开始给药(静脉注射2次, 分别在接种后1和8天), Fab'-LDM偶联物0.025, 0.05和0.10 mg/kg剂量组的抑瘤率分别为76.7%, 93.3%和94.8%, 而游离LDM 0.05 mg/kg的抑瘤率为76.1%; 另一批实验于接种肿瘤96 h后开始给药(静脉注射2次, 分别在接种后4和11天), Fab'-LDM偶联物0.025和0.05 mg/kg组的抑瘤率分别为74.2%和80.9%, 而LDM 0.05 mg/kg组的抑瘤率为60.5%. Fab'-LDM偶联物0.05 mg/kg可显著延长荷瘤小鼠的生存时间, 与同等剂量的游离LDM相比, 延长生存时间的效果更强(P < 0.05). 以上结果表明, 以Ⅳ型胶原酶为靶点的小型化单抗免疫偶联物在肿瘤的实验治疗中有显著的疗效.