细菌血红蛋白基因在产D-阿拉伯糖醇酵母菌中的克隆与表达

构建了含透明颤菌血红蛋白基因vgb和甲醛抗性基因SFA1的重组质粒pVgb EX2 ,转化到产D 阿拉伯糖醇的酵母Saccharomycessp.X 62中。转化子细胞中VHb的含量比对照菌细胞有显著提高 ,表明基因vgb在酵母细胞中得到表达。转化子发酵的D 阿拉伯糖醇产量与转化率均有提高。在重复实验中D 阿拉伯糖醇的产量最多提高了 2 7 3%。在实验条件下 ,似乎D 阿拉伯糖醇的产量与细胞VHb含量有相关性。     

用底物类似物抗性法选育海因酶高产菌种

以底物类似物抗性作为选择性标记来筛选高产海因酶的突变菌种。假单胞菌(Pscudomonas sp. )J43通过紫外光、亚硝基胍、亚硝基胍加5-氟尿嘧啶三次诱变处理后,测定了161株有5-氟尿嘧啶抗性的突变株的产海因酶活力,得到的突变株M39产海因酶活力比出发株提高了13.7倍。此法对选育其他酶或其催化产物的高产菌种可能也有意义。     

N-氨甲酰基-D-苯甘氨酸不对称热水解反应的研究

D－苯甘氨酸是半合成β－内酰胺类抗生素的重要原料,它的合成主要是从5－苯基海因出发,经海因酶开环生成N－氨甲酰基－D－苯甘氨酸后,再脱去氨甲酰基得到。后一步目前国内外主要用两种方法：一种是用亚硝酸通过迭氮化反应脱氨甲酰基^[1],另一种是用酶法脱氨甲酰基⑵。但这两种方法都存在一定问题。亚硝酸是致癌物质．会带来环境污染。酶法则由于微生物天然存在的脱氨甲酰基酶活力只有海因酶的1％～2％⑵,反应效率很低。因此,N－氨甲酰基－D一苯甘氨酸脱氨甲酰基反应就成为D－苯甘氨酸合成路线中的一个瓶颈。最近．我们发现在弱酸或弱碱条件下,N－氨甲酰基－D－苯甘氨酸加热可以得到D－苯甘氨酸,可望解决这一瓶颈问题。本文报道了对该反应的部分研究结果。     

絮凝选择载体的构建及β葡萄糖苷酶基因在酿酒酵母中的表达

从强絮凝酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ABXL-1D菌株中用PCRA-法扩增到絮凝基因(Flocculation gene,FLO1),构建以絮凝基因作选择标记的酿酒酵母表达栽体：用该栽体表达Bacillus polymyxa的β-葡萄糖苷酶基因,转化子可直接从沉淀中筛选。摇瓶培养细胞得到的β-葡萄糖苷酶比活力为3．91u／mg蛋白。在发酵葡萄糖和纤维二糖混合底物时,转化子的葡萄糖残存量明显低于受体菌。这将有利于利用纤维素发酵生产酒精。