维吾尔药神香草调节哮喘大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴功能紊乱的实验研究

目的：观察维吾尔药（维药）神香草对哮喘大鼠模型神经内分泌免疫网络若干组分的影响。方法：取雄性健康Wistar大鼠50只,随机分为正常对照组,哮喘模型组,神香草低、中、高剂量治疗组。采用致敏和雾化的方法制备哮喘模型。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血清中白介素-4（IL^4）、白介素-6（IL-6）、干扰素-γ（IFN-γ）、皮质酮（CORT）水平;放免法检测血浆中促肾上腺皮质激素（ACTH）的含量;采用实时定量-聚合酶链反应（RT—PCR）法测定下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）mRNA表达水平。结果：哮喘反复发作时,大鼠下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴紊乱,哮喘大鼠下丘脑CRHmRNA表达和血浆ACTH无明显变化,实验各组血清CORT水平升高（P〈0．05）,神香草高剂量组血清CORT含量高于低剂量组（P〈0．05）。细胞因子IFN-γ无明显变化,IL-6、IL-4有下降趋势（P〈0．05）。结论：哮喘反复发作的大鼠存在NEI网络的紊乱;神香草可以增强下丘脑．垂体．肾上腺皮质（HPA）轴的功能,改善细胞因子的平衡。这些可能是其治疗哮喘的机制之一。     

sTim-3与CD4~+ T细胞亚群细胞因子在肺结核中的表达

[目的]分析sTim-3与CD4~+ T细胞亚群细胞因子在维吾尔族肺结核患者中的表达及相关性。[方法]收集肺结核患者45例和健康对照40例外周血,ELISA方法检测研究对象血清中sTim-3、IFN-γ、IL-4、IL-17A和IL-22的含量,Pearson法分析肺结核患者血清中sTim-3与上述细胞因子间的相关性。[结果]肺结核患者、痰涂片阳性和阴性组血清sTim-3、IL-4、IL-17A和IL-22含量均高于对照组,IFN-γ含量均低于对照组(P 0. 05); sTim-3与IFN-γ负相关(r=-0. 473,P=0. 001),与IL-4正相关(r=0. 326,P=0. 029),与IL-17A、IL-22间均无相关性(P 0. 05)。[结论]肺结核患者体内sTim-3、IL-4、IL-17A和IL-22高表达,IFN-γ低表达,sTim-3与IFN-γ、IL-4具有相关性,sTim-3可能通过影响CD4~+ T细胞亚群细胞因子的分泌参与维吾尔族肺结核的发病。     

细粒棘球蚴EgG1Y162基因进化分析、表达及鉴定

目的:克隆和鉴定细粒棘球蚴的Eg G1Y162基因,分析其蛋白表达和适应性进化并鉴定抗原性。方法:根据em Y162基因序列设计引物,分别从细粒棘球绦虫原头蚴、囊壁生发层、成虫和虫卵四个发育阶段,提取基因组DNA和总RNA,mRNA反转录为c DNA,利用PCR的方法以基因组DNA和c DNA为模板扩增Eg G1Y162基因;构建PUCm-T/Eg G1Y162重组质粒,经PCR、酶切及测序鉴定后,测序确定其正确性。利用DNAman软件与MEGA4软件对Eg G1Y162基因特点进行分析并构建Eg G1Y162核酸序列的进化树进一步探讨其同源性。荧光定量PCR检测Eg G1Y162基因在细粒棘球绦虫原头蚴、囊壁生发层、成虫和虫卵四个不同发育阶段的表达情况。利用定向克隆技术将Eg G1Y162抗原基因片段克隆至原核表达质粒PET-41a上,通过酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序确定序列。IPTG初步诱导和表达Eg G1Y162-GST重组蛋白,通过SDS-PAGE电泳和Western blot试验分析鉴定。结果:从细粒棘球绦虫的两个不同发育阶段均克隆出Eg G1Y162基因,从总DNA克隆得到片段长度1 680bp,从c DNA克隆得到片段长度459bp。相似性比较表明,Eg G1Y162基因序列与em Y162相似性为91%,而Eg G1Y162基因c DNA与em Y162相似性为95%。进一步分析显示,Eg G1Y162基因序列由3个外显子和2个内含子组成,外显子区域分别为1~70,1 064~1 380和1 577~1 648。位于疏水端1~16位氨基酸构成Eg G1Y162信号肽序列,35~115位氨基酸形成一个大的纤黏连蛋白剪接体FN3,133~152位氨基酸构成羧基端跨膜区域。测序结果显示Eg G1Y162抗原基因长度为360bp,编码120个氨基酸。通过荧光定量PCR检测,发现Eg G1Y162在成虫、生发层阶段、原头蚴和虫卵阶段均有不同程度的表达。但是Eg G1Y162在成虫中的表达量最多,相对值为19.526,差异有统计学意义(P<0.01),其次生发层阶段,为5.122,再次在原头蚴阶段,相对值为5.083,而在虫卵阶段最少,为1.6588。构建的PET-41a/Eg G1Y162原核表达质粒,经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测表明Eg G1Y162-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为44k Da处有表达条带。Western blot分析显示阳性印迹条带,分子量为44k Da,Eg G1Y162重组蛋白能与细粒棘球蚴感染40天后犬的血清发生反应;与包虫病患者血清也有阳性反应。结论:成功克隆Eg G1Y162抗原基因,序列对比分析显示Eg G1Y162的c DNA与em Y162的c DNA具有很高的相似性,基因的差异性主要存在于内含子区域,Eg G1Y162抗原基因是一种新的基因。Eg G1Y162在成虫中的表达量最多。成功诱导表达出Eg G1Y162重组蛋白,并且Eg G1Y162重组蛋白具有很好的抗原性。     

针对性教学—提高药学微生物学教学质量

从药学微生物学的内涵出发,对本科教育在理论课、实验课上采用了针对专业的教学方法,希望能为药学专业的微生物教学提供一些参考资料。     

多发性骨髓瘤骨病患者血清中IL-6和TRACP-5b表达的临床意义

目的:探讨患者血清中白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、抗酒石酸盐酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRACP-5b)的水平在多发性骨髓瘤骨病(Multiple myeloma bone disease,MBD)发病中的作用及其临床意义。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测43例MBD患者组及22例MM患者组(无骨损害)及40例健康对照组血清中的IL-6、TRACP-5b的水平,并对检测结果进行统计学分析。结果:MBD患者组血清IL-6、TRACP-5b(27.93±7.45,21.33±5.66)水平较MM患者组(无骨损害)(13.58±4.85,7.23±2.86)、健康对照组(5.65±2.57,6.76±2.65)明显升高,差异有统计学意义(P0.01);Ⅲ期MM患者血清IL-6、TRACP-5b水平(31.92±7.84,24.2±7.86)明显高于I期(11.58±4.85,7.13±2.86)、Ⅱ期(22.45±6.51,14.65±6.76)MM患者,差异有统计学意义(P0.01);MBD患者血清IL-6与血清TRACP-5b水平呈正相关(r=0.915,P0.01)。结论:检测MM患者血清IL-6、TRACP-5b水平可以作为MBD的辅助诊断指标,血清IL-6、TRACP-5b可能参与了MBD的发生和发展。     

维吾尔药神香草调节哮喘大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴功能紊乱的实验研究

目的:观察维吾尔药(维药)神香草对哮喘大鼠模型神经内分泌免疫网络若干组分的影响。方法:取雄性健康Wistar大鼠50只,随机分为正常对照组,哮喘模型组,神香草低、中、高剂量治疗组。采用致敏和雾化的方法制备哮喘模型。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测血清中白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、皮质酮(CORT)水平;放免法检测血浆中促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量;采用实时定量-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA表达水平。结果:哮喘反复发作时,大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴紊乱,哮喘大鼠下丘脑CRH mRNA表达和血浆ACTH无明显变化,实验各组血清CORT水平升高(P<0.05),神香草高剂量组血清CORT含量高于低剂量组(P<0.05)。细胞因子IFN-γ无明显变化,IL-6、IL-4有下降趋势(P<0.05)。结论:哮喘反复发作的大鼠存在NEI网络的紊乱;神香草可以增强下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴的功能,改善细胞因子的平衡。这些可能是其治疗哮喘的机制之一。