野葛异黄酮合酶基因的分离与功能验证

异黄酮是野葛（Pueraria lobata）中的主要活性成分,而异黄酮合酶（IFS）是催化异黄酮生物合成的第一步关键酶,尽管野葛的IFS基因已被分离,但其功能还未得到任何验证。本研究以中国安徽省郎溪县的野葛为材料,利用RT-PCR技术成功克隆到野葛IFS基因,命名为PlIFS,PlIFS开放阅读框大小为1566 bp,编码521个氨基酸,将该基因克隆到GAL1启动子控制下的酵母表达载体pESC-TRP上,得到重组质粒pESC-TRP-PlIFS,通过LiAc/ssDNA/PEG方法将其转化进酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）WAT11中进行异源表达,并在酵母体内对其活性进行验证,结果显示PlIFS能催化甘草素生成大豆苷元,表现出异黄酮合酶活性特征。荧光定量PCR分析显示,PlIFS基因主要在野葛的根中表达,这与活性物质异黄酮主要在野葛根中的积累模式一致。     

两种影响因子对葫芦巴发根转化率的影响

葫芦巴（Trigonella foenum-graecum L.）是薯蓣皂素源植物之一，本文以来源于中国山西省的一年生草本植物葫芦巴为实验材料，研究发根农杆菌菌液浓度与超声波辅助处理两个因素对葫芦巴发根转化率的影响。结果显示，随着菌液浓度升高，发根数和发根转化率均逐渐升高，中浓度与低浓度菌液相比，发根数量和转化率分别升高了2.58和3.90倍；利用高浓度菌液侵染获得的发根数量和发根转化率最高，分别是低浓度菌液的7.33和4.32倍。在超声波处理实验中，超声（工作频率40 KHz，超声功率180 W）处理30 s与经未超声处理的对照组相比，发根数量及转化率略有下降；当超声处理60 s时，发根转化率明显上升，为对照组的2.48倍。葫芦巴发根体系的建立可为生产薯蓣皂素以及解析薯蓣皂素合成路径提供一个关键的技术平台。