革胡子鲶GH成熟肽在大肠杆菌中表达条件的优化

将携带革胡子鲶(Clarias lazera)生长激素(GH)成熟肽cDNA序列的重组表达载体pRSET-mGH转化入大肠杆菌Escherichia.coliBL21(DE3)pLysS中进行融合蛋白的表达。表达条件优化试验表明,表达菌株接种SOB培养基,培养2-3h后可用IPTG进行融合蛋白诱导表达;IPTG最佳诱导浓度为1.5 mmol/L,最佳诱导时间为4 h。本试验构建的原核表达体系为下一步革胡子鲶生长激素促生长制剂的研制奠定了基础。     

南高丛蓝莓奥尼尔快速增殖的研究

为了探讨南高丛蓝莓奥尼尔快速增殖的条件,以奥尼尔无菌苗幼嫩茎段为试验材料,对增殖培养和叶片再生条件进行研究。结果表明,WPM(改良)+0.5~1.0 mg/L ZT的增殖培养基能使增殖系数提高到5以上,且丛生苗生长健壮和生长速度快;降低盐浓度和添加玉米素是诱导叶片再生的关键;未切全叶的再生诱导优于切断叶片,前者在1/2 WPM+2.0 mg/L ZT的培养基中的再生率高达71.4%,且主要形成具有2~4个芽的簇生苗。因此,将最佳的增殖培养和叶片再生相结合,使南高丛蓝莓奥尼尔可持续快速增殖,为进一步获得优良的奥尼尔种苗及其工厂化生产奠定重要基础。     

革胡子鲶生长激素cDNA克隆与蛋白质结构分析

从革胡子鲶(Clarias lazera(Burchell))的脑垂体组织中提取总RNA, 应用RT-PCR方法, 扩增得到了革胡子鲶生长激素(Growth hormone, GH)基因cDNA的开放阅读框(Open reading frame, ORF)序列。ORF全长为603 nt, 编码由22个信号肽氨基酸和178个成熟肽氨基酸共同组成的生长激素前体蛋白。序列同源比较结果表明, 研究中得到的革胡子鲶生长激素氨基酸序列与GenBank中已报道的其他6种鲶形目鱼类的氨基酸序列同源性高达95.8%。二级结构预测分析结果表明, 革胡子鲶生长激素蛋白中含有a 螺旋、b 折叠和b 转角以及无规卷曲等二级结构, 以a 螺旋为主, 是典型的a 型结构蛋白质。此外, 抗原性分析表明, 在氨基酸序列中的4个区域均可形成优势抗原表位, 其结构特点非常适合改造成为重组生长激素疫苗或单克隆抗体制剂加以开发利用。