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1.
目的:将带有DNA聚合酶iota(DNA Polymerase iota,Polι)目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,建立DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中的高表达体系,为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础.方法:用脂质体2000(Lipofectamine2000)将带有目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,通过G418筛选抗性克隆,用一步法提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测出高表达克隆.结果:通过G418筛选筛选出了具有G418抗性的克隆,通过RT-PCR技术检测出高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系.结论:建立了高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系.为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础.  相似文献   
2.
通过R100-1的接合转移和非接合转移的温度选择两种方法分别获得了一系列mer::Tn2突变体。回复试验和杂交结果表明,通过接合转移分得的22株mer::Tn2突变体中有7株发生了长度不等的缺失;但通过非接合转移的温度选择法获得的17株mer::Tn2突变体中没有发现缺失株。这一结果进一步证明Tn2促进缺失形成与R因子的接合转移有关。  相似文献   
3.
运用同源重组技术破坏了黑曲霉基因组中的pepD基因,该基因编码一种类subtilisin的胞外蛋白酶PEPD。实验以黑曲霉GICC2773基因组DNA为模板,PCR扩增pepD基因,并在此基因中间插入潮霉素抗性基因(hph)表达单元,由此产生了3.7kb的pepD阻断基因片段。将此阻断基因片段与载体pBS连接,构建成pepD基因阻断质粒pBSDH。采用原生质体-CaCl2/PEG法将酶切阻断质粒得到的含pepD基因和hph表达单元的3.7kb线性片段转化AspergillusnigerGICC2773菌株,在含潮霉素的平板上筛选潮霉素抗性转化子,从这些抗性转化子中经PCR检测分离到到1个pepD基因阻断突变菌株?pepD66。外源漆酶分泌活性分析显示,黑曲霉pepD基因的破坏使其外源漆酶的分泌表达有所提高。  相似文献   
4.
The amber mutation sites of 6 purR(am) mutants were determined by cloning and DMA sequencing. The results showed that the mutations were distributed at three different sites in PurR coding region, G721(→A), C933(→T) and C1155(→T), which respectively turn Trp-147,Gln-218 and Gln-292 of PurR into TAG terminal codon. To determine the effect of the three amino acid residues on regulatory function of PurR protein 5 different kinds of tRNA suppressor genes, Su3, Su4, Su6, Su7 and Su9 were used for creating the PurR protein variants with single amino acid substitution. The results indicated that Cys, Glu, Gly, His and Arg which substituted Trp-147 respectively all could not recover the regulation function of PurR. It confirmed that Trp-147 is a critical amino acid for the PurR function. Gln-292 substituted respectively by the same amino acids also could not recover the PurR function, demonstrating that Gln-292 is also an important amino acid residue in PurR.  相似文献   
5.
地高辛标记Vero细胞DNA,并制备成DNA探针,以此探针进行点杂交,确定探针的工作浓度,特异性及灵敏度,并用此法监测Vero细胞狂犬病疫苗浓缩原液纯化工艺的Vero细胞DNA去除率,测定精制Vero细胞狂犬病疫苗成品中残余Vero细胞DNA含量,结果明显,该法特异性强,重复性好,快速简便,灵敏度高,检测值可达5pg/剂量,可用于精制ero细胞狂犬病疫苗纯化工艺的质量控制和半成品检定。  相似文献   
6.
为研究16bp PURbox 中8 个完全保守的碱基中的2 个碱基在与purR+ 阻遏蛋白结合中的功能,对它们分别作了定点突变,使其分别从C,G 突变为G,A。凝胶阻滞实验结果表明,含上述保守碱基突变的PURbox 均不能与purR+ 阻遏蛋白结合。证明这2 个保守碱基对维持PURbox 的功能是必须的,其中任一改变都导致PURbox 功能的丧失。  相似文献   
7.
以互花米草凋落物为化感供体材料,研究不同浓度的互花米草凋落物浸提液(0、0.02、0.04和0.10 mg·L~(-1))对中肋骨条藻生长及生理生化特征的化感效应,分离鉴定互花米草浸提液中的抑藻化感物质成分。结果表明:互花米草凋落物浸提液对中肋骨条藻生长的抑制作用随着浸提液质量浓度的增大而增强,当质量浓度为0.10 mg·L~(-1)时,互花米草凋落物浸提液对中肋骨条藻的抑制率达到69.2%;各实验处理组的中肋骨条藻细胞内的叶绿素a含量和抗氧化酶活性均低于对照组,而丙二醛的含量高于对照组;对互花米草凋落物浸提液进行抑藻化感物质的分离鉴定,其化感物质主要为长链脂肪酸,主要成分为十六烷酸、亚油酸、油酸。  相似文献   
8.
9.
目的:比较不同手术方式治疗慢性鼻-鼻窦炎的疗效及其对上颌窦黏膜纤毛传输功能的影响,为临床制定治疗慢性鼻-鼻窦炎的优选术式提供参考依据。方法:选取2013年9月-2014年12月于本院耳鼻咽喉科就诊的160例确诊为慢性鼻-鼻窦炎的患者作为研究对象,将其随机分为4组,分别为治疗组1~4,每组各60例。治疗组1接受上颌窦自然开口扩大术,治疗组2接受上颌窦开窗术,治疗组3接受经泪前隐窝上颌窦开放术,治疗组4接受上颌窦口球囊扩张术。观察和比较4组患者的术后鼻腔黏膜的覆盖、水肿、囊泡形成、骨质暴露、瘢痕形成等情况,上颌窦窦腔内分泌物性状、蓄积情况以及术后3个月和6个月时行上颌窦腔糖精实验及窦口周黏膜活检情况。结果:四组手术后均取得较好临床疗效,而组4的临床总有效率显著高于其他三组(均P0.05)。术后3、6个月,组4Lund-Kennedy评分和MMT时间均明显低于其他三组(均P0.05);在上颌窦黏膜活检方面:术后炎性细胞数量及状细胞和黏膜下腺体细胞形态及黏膜下结构水肿改善程度亦在中组四最为显著(P0.05)。结论:上颌窦窦球囊扩张术治疗慢性鼻-鼻窦炎疗效较高,可有效改善状细胞和黏膜下腺体细胞形态及鼻窦黏膜水肿、窦口通畅引流等作用,且安全性高。  相似文献   
10.
三唑磷的杀螨活性及其与水胺硫磷复配的增效作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
三唑磷和水胺硫磷以及它们的复配制剂对拈全瓜啭进行室内毒力测定,表明三唑磷的毒力明显大于水胺硫磷,两种药剂的各种复配均对枯全爪螨存在着不同程度的增效作用,其中以三唑磷和水胺硫磷按1:4的比例复配增效作用最为明显,共毒系数达到258。田间药效试验也表明,30%的混剂乳油(6%三唑磷 24%水胺硫磷)1000倍液的药技明显高于40%的水胺硫磷1000倍液乳油,而与20%的三唑磷乳油1000倍液相当。  相似文献   
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