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目的:构建VIM(Vimentin)基因的真核表达载体,以深入研究VIM的功能及其在相关疾病中的作用.方法:从人cDNA文库中,以RT-PCR方法扩增出1401bp的VIM编码区片段,胶回收后连接入T.载体,测序鉴定.再用Hind Ⅲ和BamHI双酶切,将VIM编码区片段定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,酶切鉴定重组质粒.将重组质粒转染NIH3T3细胞,分别以RT-PCR和Western Blot方法检测VIM的mRNA表达和蛋白表达.结果:将人VIM编码区基因成功克隆到真核表达载体pcDNA3.1中;继而转染NIH3T3细胞后,RT-PCR和Western Blot结果显示细胞可以表达VIM的mRNA和蛋白.结论:成功构建pcDNA3.1-VIM的真核表达载体,为进一步研究VIM基因的功能以及其在相关疾病中的作用奠定了基础. 相似文献
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蛋白酶体途径对花粉发育调控具有重要作用, 但花粉发育过程中蛋白酶体的分布及其活性的动态变化一直未见报道。蛋白酶体荧光底物结合荧光分光光度计分析表明, 蛋白酶体的活性从单核小孢子到具有2个原叶细胞的三细胞花粉逐渐增强, 而在成熟花粉中略有下降。免疫荧光标记结合共聚焦显微镜分析表明, 蛋白酶体不均匀地分布于细胞质和细胞核中, 并在花粉细胞不均等分裂过程中聚集分布于先后产生的2个原叶细胞内。总之, 蛋白酶体的活性及其分布在花粉发育过程中存在相关的时空动态变化, 表明裸子植物花粉中的蛋白酶体活性及其分布与花粉发育具有相关性, 并在原叶细胞的退化过程中起重要作用。 相似文献
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