竹节参皂苷IVa减轻异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌纤维化作用机制研究

摘要 目的：探讨竹节参皂苷（IVa）减轻异丙肾上腺素（ISO）诱导的小鼠心肌纤维化作用机制。方法：白变种实验室老鼠（Balb/C）小鼠40只并随机分为4组：正常对照组（n=10）、ISO模型组（n=10）、IVa低剂量组（n=10）、IVa高剂量组（n=10）。采用皮下注射ISO构建小鼠心肌纤维化模型,IVa剂量组在建模同时给予IVa治疗,正常组给予等量生理盐水。采用马松（Masson）三色标准和HE染色方法分析评估心脏组织形态学和胶原沉积。采用小麦胚芽凝集素（WGA）染色法测定心肌细胞面积。蛋白免疫印迹试验检测细胞自噬相关标志物（LC3-Ⅱ、Beclin1和p62）和腺苷单磷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/自噬激活激酶1（ULK1）信号通路相关标志物。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中血管紧张素II（Ang II）和I型前胶原羧基末端肽（PICP）的含量。结果：高剂量IVa（15mg/kg）治疗后,HW/BW和LVW/BW较ISO模型组升高,而血清中Ang II和PICP含量降低。IVa以剂量依赖的方式减轻心肌细胞在心脏组织中的损伤。皮下注射ISO后,心肌间质内胶原沉积明显,IVa治疗后胶原沉积明显减少。IVa可有效降低ISO诱导的小鼠心肌细胞面积大小。IVa能有效抑制ISO诱导的LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白降低,减少p62蛋白增多。AMPK直接磷酸化ULK1（Ser555）,通过抑制mTOR磷酸化间接抑制ULK1（Ser757）磷酸化,均参与了ISO诱导的心肌纤维化小鼠自噬活性的降低;此外,IVa低剂量组和IVa高剂量组均显著增加了AMPK磷酸化,并抑制了mTOR磷酸化,降低了ULK1(Ser757)磷酸化。结论：IVa通过AMPK/mTOR/ULK1途径激活自噬,减轻了ISO诱导的心肌纤维化。表明IVa是一种潜在的抗心肌纤维化候选药物,是治疗心脏病的潜在药物靶点。     

性早熟雌性Sprague-Dawle大鼠下丘脑Lin28a和Lin28b表达异常

目的：研究正常雌性Sprague-Dawle（SD）大鼠不同性发育阶段及雌激素诱导性早熟后下丘脑Lin28a和Lin28b的表达及意义。方法：1）于雌性SD大鼠出生后15日（postnatal day 15,PND15）、PND23、PND35荧光实时定量PCR分析下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA的表达,同时以ELISA法检测血清黄体生成素（LH）和雌二醇（E2）水平变化;2）苯甲酸雌二醇（estradiol benzoate,EB）诱导的性早熟大鼠随机分为EB-1组和EB-2组,分别于阴道开口（vaginal opening,VO）时及PND56两个时间点处死,相应的发育阶段的大鼠用无菌芝麻油（sesame oil,OIL）作为对照分为OIL-1和OIL-2组;荧光实时定量PCR分析下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA的表达,ELISA法检测LH和E2水平变化,并观察性早熟对大鼠阴道开口、体重、顶臀径、胫骨长等生长发育指标的影响。结果：1）PND15、PND23和PND35组下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA表达、血清LH和E2水平无统计学差异（P〉0.05）;2）EB-1组下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA表达高于OIL-1组（P〈0.05）,血清LH和E2水平与OIL-1组相比无统计学差异（P〉0.05）;EB-2组下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA表达高于OIL-2组（P〈0.05）,血清LH和E2水平低于OIL-2组（P〈0.05）;3）与OIL-2组比较,EB-2组VO时间明显提前（P〈0.01）,体重、顶臀长、胫骨长差异无统计学差异（P〉0.05）。结论：外源性雌激素引起的性早熟可能导致下丘脑Lin28a和Lin28b表达异常。     

性早熟雌性Sprague-Dawle大鼠下丘脑Lin28a和Lin28b表达异常

目的:研究正常雌性Sprague-Dawle(SD)大鼠不同性发育阶段及雌激素诱导性早熟后下丘脑Lin28a和Lin28b的表达及意义。方法:1)于雌性SD大鼠出生后15日(postnatal day 15,PND15)、PND23、PND35荧光实时定量PCR分析下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA的表达,同时以ELISA法检测血清黄体生成素(LH)和雌二醇(E2)水平变化;2)苯甲酸雌二醇(estradiol benzoate,EB)诱导的性早熟大鼠随机分为EB-1组和EB-2组,分别于阴道开口(vaginal opening,VO)时及PND56两个时间点处死,相应的发育阶段的大鼠用无菌芝麻油(sesame oil,OIL)作为对照分为OIL-1和OIL-2组;荧光实时定量PCR分析下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA的表达,ELISA法检测LH和E2水平变化,并观察性早熟对大鼠阴道开口、体重、顶臀径、胫骨长等生长发育指标的影响。结果:1)PND15、PND23和PND35组下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA表达、血清LH和E2水平无统计学差异(P0.05);2)EB-1组下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA表达高于OIL-1组(P0.05),血清LH和E2水平与OIL-1组相比无统计学差异(P0.05);EB-2组下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA表达高于OIL-2组(P0.05),血清LH和E2水平低于OIL-2组(P0.05);3)与OIL-2组比较,EB-2组VO时间明显提前(P0.01),体重、顶臀长、胫骨长差异无统计学差异(P0.05)。结论:外源性雌激素引起的性早熟可能导致下丘脑Lin28a和Lin28b表达异常。