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酵母整合型载体的构建及其功能分析 总被引:2,自引:0,他引:2
选取酿酒酵母基因组rDNA序列中25S和5S rDNA之间的一段约2.2 kb序列作为整合载体同源重组到酿酒酵母基因组中的靶位点,PCR扩增得到该段序列左右2段大小分别为865 bp和1 350 bp的片段,将其与 URA3、磷酸丙糖异构酶启动子和终止子序列依次克隆入pUC18中,构建成整合型载体pNK.以绿色荧光蛋白基因为报告基因,荧光显微镜下观察到酿酒酵母菌株INVSc1转化子发出较强荧光,Southern 杂交产生目的条带,这些结果表明载体 pNK 具有整合并表达外源基因功能.通过对转化子连续培养证明构建的整合型载体的稳定性较高. 相似文献
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益生菌生物药物是指通过口服表达药用多肽(蛋白)的重组益生菌活细胞达到治疗疾病的新型口服给药系统。为了构建一种能有效防治2型糖尿病的酵母生物药物,文章首先构建了酿酒酵母(S.cerevisiae)整合型表达载体p NK1-PGK,并且通过绿色荧光蛋白(GFP)证明其表达功能正常,利用该载体将10?GLP-1(Glucagon-like peptide-1)基因转化到酿酒酵母INVSc1中,通过营养缺陷型和Western blotting成功筛选出表达10?GLP-1的长效促胰岛素降糖酵母(Long-acting GLP-1 hypoglycemic yeast,LHY)。该酵母生长迅速,外源基因10?GLP-1表达稳定,表达量达到1.56 mg/g细胞湿重。通过链脲佐菌素和高脂高糖饮食联合诱导的方法构建了2型糖尿病小鼠模型,用LHY对其进行口服灌胃治疗,证明LHY具有较好疗效,明显降低血糖水平。 相似文献
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