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1.
癌基因iASPP的克隆、表达与纯化   总被引:1,自引:0,他引:1  
iASPP是新近发现的高度保守的p53相关基因,其蛋白产物定位于细胞核内,具有结合NFκBp65亚基和p53功能,进而抑制NFκB的转录调节和p53对凋亡的调节功能。利用RTPCR方法从人白血病细胞系U937中克隆出癌基因iASPP,将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,成功构建iASPP表达载体PIAF,重组质粒读码框和序列与预期一致。在IPTG诱导下,重组载体大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,表达产物经SDSPAGE和Westernblot方法分析证实系iASPP融合蛋白。利用Ni离子鳌合层析的方法纯化iASPP融合蛋白,经SDSPAGE鉴定其纯度超过80%。  相似文献   
2.
rhM-CSFsR在大肠杆菌中的表达及其配基结合活性分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)胞外具有结合活性区域的cDNA,经平端连接将其克隆到原核表达载体pET-28a的His-Tag下游,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,重组的人可溶型M-CSFR(rhM-CSFsR)在宿主菌中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的38%.重组蛋白经Ni2+组氨酸结合树脂螯合层析柱纯化,获得了纯化的rhM-CSFsR,经SDS-PAGE显示为单一区带,其表观分子量为34kD.用酶联免疫吸附分析(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)证明rhM-CSFsR有明显的M-CSF专一结合活性,Kd值为7.8nmol/L,只有一个M-CSF结合位点.本实验结果显示原核表达的rhM-CSFsR具有明显的配基结合活性,提示M-CSFR的糖基化程度对于其配基结合活性不是必不可少的,为深入进行rhM-CSFsR的生物学功能及其临床意义的研究打下了良好的基础  相似文献   
3.
srhM-CSFR在昆虫细胞中的表达及其配基结合活性分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
从人胎盘中提取总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体 ( M-CSFR)胞外区的、具有全部配基结合活性区域的前三个免疫球样蛋白结构域的 DNA,将其克隆到杆状病毒载体 pbluebac4.5中 ,与杆状病毒 DNA一同转导昆虫细胞 Sf9.经过 2轮筛选 ,获得了纯化的重组病毒 ,再用重组病毒感染昆虫细胞 ,Western印迹检测证明 srh M- CSFR得到了表达 ,它是分泌到上清液中的糖基化蛋白 .Western印迹分析了不同时间点的 srh M- CSFR表达情况 ,结果表明 srh M- CSFR的表达在 96~ 1 2 0 h时达到最大 .srh M- CSFR的产量约为 1 mg/L,EIA法进行配基结合活性分析表明 ,srh M- CSFR与 M- CSF结合的解离常数为 5nmol/L.  相似文献   
4.
为研究烟管头草的化学成分及其对白血病细胞的体外抑制作用,该文采用硅胶柱层析、凝胶柱层析、大孔吸附树脂等方法对烟管头草(Carpesium cernuum)乙酸乙酯部位进行分离纯化,并运用1H NMR、13C NMR和MS等波谱技术对化合物进行结构鉴定,采用MTT法测定化合物1-10对白血病细胞(K562、HEL)的体外抑制作用。结果表明:(1)从烟管头草乙酸乙酯部位共分离鉴定了11个化合物,分别为2, 9-epoxy-5, 9-dihydroxy-8-angeloyloxy-11-methoxymethyl-4(15)-germacraen-6, 12-olide(1)、cardivin D(2)、cernuumolide I(3)、cernuumolide J(4)、8-hydroxy-9, 10-diisobutyryloxythymol(5)、(2E, 6Z, 10E, 12R)-7-[(acetyloxy)methyl]-3, 11, 15-trimethylhexadeca-2, 6, 10, 14-tetraene-1, 12-diol(6)、9, 10-dihydroxyoctadecanoate(7)、1, 6-dihydroxy-8-hydroxymethyl-anthraquinone(8)、emodin(9)、4-megastigmen-3, 9-dione(10)、β-谷甾醇(11)。其中化合物1为新化合物,化合物5、7-10均为首次从天名精属中分离得到,化合物2、5-10均为首次从烟管头草中分离得到。(2)活性测试结果表明化合物cardivin D(2)、cernuumolide I(3)和cernuumolide J(4)对白血病细胞具有较好的体外抑制作用,其中对K562细胞的IC50值分别为(2.27±0.46)、(5.53±0.41)、(3.90±0.80)μmol·L-1,对HEL细胞的IC50值分别为(1.84±0.14)、(2.36±0.90)、(2.31±1.17)μmol·L-1。该研究结果丰富了烟管头草的化学成分,为抗白血病药物的研发提供了物质基础。  相似文献   
5.
RHO蛋白家族与细胞极性   总被引:2,自引:0,他引:2  
细胞的极性形成对细胞发育、分化及其功能的发挥起着举足轻重的作用,细胞极性的丧失与肿瘤的发生发展密切相关.小G蛋白Rho家族是肌动蛋白细胞骨架重新组装的主要调节因子之一,在协调细胞极性化和正常的形态形成过程中起重要作用.现就Rho蛋白家族与细胞极性及二者的关系作一综述.  相似文献   
6.
自我更新、多向分化和静息状态是造血干细胞的重要特征,其中静息状态的维持是维持造血干细胞数量及造血干细胞池稳定的重要机制。骨髓微环境是造血干细胞定居的场所,是维持造血干细胞静息必要的土壤,尤其是成骨细胞微环境可通过多种跨膜分子信号通路、黏附分子等调节造血干细胞的静息。造血干细胞静息关系到造血干细胞自我更新的平衡,其失衡与白血病的发生及白血病干细胞的干性维持相关。该文通过总结近几年最新研究进展并结合作者实验室的研究成果,对介导骨髓微环境调节造血干细胞静息的主要分子机制作一综述。  相似文献   
7.
抗人CD19单链抗体基因的构建、表达及功能测定   总被引:7,自引:0,他引:7  
采用RT-PCR方法从分泌抗人类白细胞表面分化抗原CD19单克隆抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL可变区基因,再通过重叠延伸拼接(spliceoverlap extension)PCR方法在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人CD19单链抗体(抗CD19-ScFv)基因。将其克隆至表达载体PET28a并在大肠杆菌中表达。SDS-PAGE和Westernblot分析结果表明,抗CD19-ScFv在BL21(DE3)菌中获得表达,重组蛋白的相对分子量为27kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经过溶解包涵体,镍柱亲和层析纯化和体外复性过程,获得了高纯度的单链抗体片段。流式细胞分析结果证实抗CD19ScFv可与人类白细胞表面的分化抗原CD19结合,保留了鼠源性单抗与CD19结合活性。抗人CD19-ScFv的构建与表达,为下一步针对B淋巴系统恶性肿瘤的靶向治疗奠定了基础。  相似文献   
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