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1.
以马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus, EIAV)基因转移载体pcPPTWPRE为基础,用含不同长度片段的鸡β-肌动蛋白启动子替换原有的人巨细胞病毒立即早期启动子(CMVIEp)启动外源基因的表达,分别构建了2个基因转移载体,含部分第一内含子的pWCAGP0.8和含全长内含子的pWCAGP1.6。连同在其它研究中构建的不含内含子的质粒pcPPTWCAG(另文发表),采用磷酸钙法分别转染HEK293细胞和DF-1细胞, 利用荧光显微镜观察报告基因eGFP蛋白的表达。并利用流式细胞仪定量。统计学分析结果表明,在HEK293细胞中,pcPPTWCAG、pWCAGP0.8和 pWCAGP1.6表达阳性率分别为47.9%、46.1%和23.8%,转染后48h,收获细胞,利用流式细胞仪比较转染细胞中EGFP表达阳性细胞的百分率。结果表明,在HEK293细胞中,pcPPTWCAG、pWCAGP0.8 和pWCAGP1.6的阳性细胞分别占计数细胞的47.9%、46.1%和23.8%;在DF-1细胞中,依次分别为12.4%、9.5%和4.2%,pcPPTWCAG与pWCAGP1.6差异显著。本研究表明不含内含子的EIAV载体质粒表达EGFP的能力高于含部分和全长内含子的载体。  相似文献   
2.
猪2型圆环病毒原核表达产物的免疫原性测定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的检测猪2型圆环病毒(PCV2)全基因组原核表达产物的免疫原性。方法根据PCV2JXL株序列(GenBank登录号AY491310),设计合成引物,利用多聚酶链式反应(PCR)从含有PCV2接种猪肾细胞PK15中扩增了Cap蛋白的氨基端片段(737-421nt),克隆入上游带有谷光苷肽-S-转移酶的原核表达载体pGEX-6p-1中,获得重组质粒pGEX-PCV737-421。PCV2Cap蛋白羧基端(426-37nt)和Rep蛋白已在过去的研究中分别融合表达。利用IPTG对3种重组大肠杆菌BL21进行诱导,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAGE)以及对PCV2阳性猪多抗血清的蛋白免疫印迹试验,在此基础上,将3种SDS-PAGE分离粗纯的重组表达产物碾碎后分别免疫BALB/c小鼠,用获得的抗鼠血清与PCV2病毒感染PK15细胞做间接免疫荧光抗体试验(IFA)。结果PCV2Cap蛋白的氨基端片段能在大肠杆菌中表达,且Cap蛋白羧基端和Rep蛋白的原核表达产物都能在免疫印迹试验中被PCV2阳性猪血清检测出特异性条带,重组蛋白免疫鼠血清可在IFA试验中观察到特异性的荧光分布,即检测到培养细胞中的病毒抗原。结论PCV2全基因组都可以用原核系统高效表达,且表达产物具有免疫原性。  相似文献   
3.
目的分别测定7日龄和56日龄的HBK-SPF鸭的解剖学数据,并分析比较性别之间的差异。方法采用常规方法测定7日龄和56日龄的雌、雄HBK-SPF鸭的解剖数据,并对雌雄差异进行了统计学分析。结果在所测定的解剖数据中,不同日龄、性别之间表现差异显著性的项目不同,其中7日龄时,左肾、右肾存在性别差异,达到极显著(P〈0.01),胫围和盲肠2存在显著性别差异(P〈0.05);56日龄时,只有胸腺存在极显著性别差异(P〈0.01),盲肠1和直肠差异显著(P〈0.05),其它解剖数据在雌雄之间差异不显著。结论不同日龄的HBK-SPF鸭的解剖数据和脏器参数存在性别差异。  相似文献   
4.
目的应用5-HT抗血清研究40周HBK-SPF鸭胃肠道内的5-HT免疫活性细胞的分布密度及形态,并探讨其分布型的成因及细胞形态与功能的关系。方法免疫组织化学ABC法。结果5-HT细胞主要分布于十二指肠及其以下部位,腺胃偶见,分布密度近似呈波浪形,其中以直肠分布密度最高,小肠呈U形分布。5-HT细胞的形态多样,呈圆形、椭圆形、锥体形等,主要分布于胃肠粘膜上皮之间、上皮基部、固有膜以及腺泡上皮之间等。结论40周HBK—SPF鸭5-HT细胞分布型的形成与各部位消化功能有关;根据其形态,我们认为40周HBK—SPF鸭胃肠道内5-HT细胞具有内、外分泌两种功能。  相似文献   
5.
实验动物病原学感染实验在兽医科学和生物制品研究等方面发挥越来越大的作用。我们对从2009年1月1日至2014年4月正式发表在美国国家生物技术信息中心(NCBI)的以禽类进行感染试验的科研报告进行了文献汇总,重点关注动物福利,尤其是安乐死方面。通过对247项研究报告的调查,虽然几乎所有报告都声称通过其所在单位的动物实验和管理福利委员会的审核,但同类感染实验中采用的临终终点的判定和安乐术不尽相同,麻醉途径和剂量也缺乏标准。文章对目前国际上报道的安乐术的特点也做了比较。  相似文献   
6.
猪 2型圆环病毒 (porcinecircovirus 2 ,PCV2 )是断乳仔猪多系统衰竭综合征 (postweaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)的原发性病原。PCV2的ORF2编码病毒唯一的结构蛋白Cap。根据GenBank中公布的PCV2JXL株的序列设计一对引物 ,应用PCR方法从该毒株感染的PK 15细胞中扩增出完整的ORF2基因 ,将此基因克隆于本实验室此前构建的塞姆利基森林病毒 (SemlikiForestvirus,SFV)RNA复制子衍生的新型真核表达载体Psfv1cs中的BamHⅠ位点 ,获得重组质粒pSFV1CS Cap。用pSFV1CS-Cap分别转染BHK-21细胞和293T细胞 ,经间接免疫荧光试验检测表明 ,PCV2 ORF2基因在转染细胞中得到表达。小鼠接种试验表明 ,该重组质粒能诱导小鼠产生特异性抗体.  相似文献   
7.
仙台病毒黑龙江省地方株的分离与鉴定   总被引:4,自引:2,他引:2  
目的自本省普通级实验动物中分离并鉴定出仙台病毒地方毒株,为建立仙台病毒血清抗体检测方法奠定基础。方法通过鸡胚尿囊腔传代自普通级小鼠肺脏分离病毒,经血凝实验、血凝阻断实验和结构基因序列测定对分离得到的病毒进行鉴定;大量繁殖病毒并通过蔗糖密度梯度离心纯化,免疫动物制备阳性血清,用标准试剂盒检测阳性血清效价。结果自150份小鼠肺脏分离到2株有血凝性的病毒,经形态学、血清学和结构基因序列测定鉴定为仙台病毒,命名为SV-HLJ。SV-HLJ与标准毒株Fushimi核蛋白基因(N)的核苷酸、氨基酸同源性分别为99·6%和99·0%。结论分离并鉴定出了仙台病毒黑龙江省地方毒株,为检测试剂盒的研制奠定了基础。  相似文献   
8.
马立克氏病(MD)对养禽业危害极大,可导致鸡群的免疫抑制,引起继发感染和免疫失败。然而,不同品系鸡对马立克氏病毒(MDV)抗性差异较大,呈现出较高的遗传相关性。近年来,随着MDV抗性研究的不断深入,与MDV抗性相关基因的研究已成为研究热点,本文就其研究进展作一综述。  相似文献   
9.
目的对送检的黑龙江省生产的实验大鼠遗传概貌进行分析。方法参照国家标准《实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法》GB/T14927.1-2001,应用乙酸纤维素板,利用Akp1、Es1、Es3、Es4、Es6、Es8、Es9和Es10等8种同工酶位点,对来自编号分别为2011、2014、3026、8028和8029的5个单位的SD、Wistar、DA、PVG等4个品系的25只实验大鼠,进行生化标记位点的检测。结果除单位2014的SD大鼠在Es3存在a和b两种带型,8028和8029未检测Es10、2014和3026未检测Es6,8,9,其余各单位的大鼠在8个位点都表现出相同的带型。结论送检的黑龙江省生产的SD和Wistar大鼠符合封闭群遗传学概貌;DA和PVG大鼠样品间带型一致。  相似文献   
10.
目的测定不同周龄的BWEL-SPF种鸡生理和生化指标,并对测定值进行t-检验。方法分别采用计数板法、血涂片法、血液全自动分析仪测定法、双缩尿法、溴甲酚绿法、酶比色法和硫氰酸汞比色法等测定了10、40和60周龄的雌、雄BWEL-SPF种鸡的生理生化指标,并对雌、雄差异进行了统计学分析。结果在所测定的生理生化指标中,不同周龄雌雄之间差异显著性表现项目不同,其中在10周龄时,只有总胆固醇(CHO)在雌、雄之间差异极显著(P〈0.01);40周龄时,甘油三酯(TG)、在雌、雄之间差异极显著(P〈0.01);总胆固醇(CHO)为雌、雄之间差异显著(P〈0.05);60周龄时,出血时间(BT)、嗜碱性粒细胞(B)、单核细胞(M)、谷丙转氨酶(ALT)、葡萄糖(Glu)在雌、雄之间差异极显著(P〈0.01),而凝血时间(CT)和甘油三酯(TG)在雌、雄之间差异显著(P〈0.05).除此以外,其它生理生化指标在雌雄之间差异不显著。结论BWEL-SPF种鸡的生理和生化指标随周龄不同,在雌、雄之间的差异随之变化。  相似文献   
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