小鼠鼻咽部组织相对特异基因调控区的克隆与分析

通过RT－PCR证实PLUNC基因在小鼠鼻咽部具有相对特异性表达。进一步用染色体步移的方法克隆该基因5′端旁侧序列847bp,网上分析结果提示此序列具有调控活性,体外报道基因的研究亦证实这一结果。进一步的研究表明,其核心调控区位于转录起始位点上游200bp之内。这一工作将为构建鼻咽癌转基因动物提供良好的前提。     

免疫磁珠法分离鼻咽癌基质的T淋巴细胞

肿瘤内环境与肿瘤的发生密切相关.肿瘤细胞周围的组织在癌变发生时不会是一个沉默的旁观者,可能在肿瘤的发生和发展中扮演十分重要的角色.本研究分别采用不同的磁珠分选技术分离T淋巴细胞.采用CK LMP1,CD105和成纤维细胞表面蛋白,结合全血总T细胞试剂盒,间接法分离鼻咽癌基质的T淋巴细胞;采用CD3直接磁分选法分离鼻咽癌基质的T淋巴细胞,然后用免疫组化法鉴定分选的效果和细胞的质量.结果表明,免疫组化显示间接磁分选法分离出来的T淋巴细胞不能完全去除肿瘤细胞,RNA的质量不佳;而直接磁分选分离出来的T淋巴细胞为纯净的T淋巴细胞,而且RNA的质量良好.提示直接磁分选技术是分离鼻咽癌基质T淋巴细胞的首选方法.     

非洲爪蟾GATA-1b中与GATA-1a的差异位点突变后的功能

非洲爪蟾GATA 1因子分为GATA 1a和GATA 1b两种亚型。与其他种类的GATA 1因子相类似 ,GATA 1是红细胞分化成熟所必需的因子之一。二种亚型在造血方面具有同样的作用 ,但只有xGATA 1b具有抑制神经发生的功能。比较二者的结构 ,发现二者的核酸和蛋白质结构虽然都非常相似 ,但并不完全一致。为探讨这些差异结构与功能之间的关系 ,我们对xGATA 1b中与xGATA 1a差异的Ser1 6 8和His1 6 9位点进行缺失突变 ,并定点突变Thr30 4和Thr359位点。之后将体外制备好的野生型或突变型xGATA 1bmRNA单独或与DN BRmRNA共同导入非洲爪蟾 2细胞胚胎内 ,利用动物帽系统分析突变体在神经发生和造血方面的功能。结果发现 ,Ser1 6 8和His1 6 9以及Thr359位点突变后 ,xGATA 1b再不能抑制DN BR诱导的神经发生 ;但所有突变都未影响xGATA 1b在造血方面的功能。由此 ,我们首次证实了Ser1 6 8和His1 6 9以及Thr359位点可能是导致xGATA 1b和xGATA 1a之间功能分离的结构基础之一。