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目的从分泌抗肠出血性大肠埃希菌Ⅱ型志贺毒素中和单克隆抗体杂交瘤细胞株S2C4中克隆抗体可变区基因,构建单链抗体(ScFv),进行原核表达,并对其功能进行鉴定。方法从杂交瘤细胞株S2C4中提取总RNA,逆转录成cDNA。在cDNA3’-OH末端添加poly.G。PCR扩增包括5’非翻译区和信号肽序列在内的抗体重、轻链可变区基因VH和VL,PCR产物装入T—A载体测序。根据测序结果,设计引物分别扩增VH和VL编码区,再通过重叠PCR,在VH和VL.编码区基因之间引入连接链,构建Scn基因,并克隆到表达载体pComb3xSS中。重组载体导入E.coliTop10F’进行表达,重组蛋白经纯化后,分别用ELISA和动物保护性实验鉴定其生物学活性。结果VH和VL编码区基因全长分别为396bp和378bp,ScFv基因能在大肠埃希菌中高效表达,表达产物的分子量为34000,用NiSO4亲和层析柱成功纯化。功能性实验表明纯化的重组蛋白可以与Stx2毒素有效结合,能保护动物抵御毒素分子的攻击。结论成功地克隆S2C4单抗可变区基因,并构建、表达其单链抗体ScFv,为下一步进行该抗体人源化奠定实验基础。 相似文献
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癫痫是一种严重危害人类健康的常见中枢系统病,其反复发作会对脑组织造成损伤,以致产生认知功能障碍.针灸很早即被应用于癫痫的临床治疗,但近年来其改善癫痫后脑损伤实验机制及临床治疗效果的研究才逐渐被加以重视.针灸的优势在于可以通过激发机体自身调节达到治疗目的,从而避免使用抗癫痫药物产生不良反应.针灸改善癫痫后脑损伤的机制以抑制海马区神经元凋亡为主,同时伴有抑制胶质细胞增生、抑制齿状回颗粒层苔藓纤维发芽等.针灸临床效果证实任督二脉取穴配合辨证取穴及头部局部取穴是有效的.本文即是关于针灸治疗癫痫后脑损伤的机制研究及针刺临床疗效的进展综述. 相似文献
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