鹅圆环病毒感染性克隆的构建及其转染试验

设计带BamHⅠ酶切标记位点的引物,PCR扩增鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pGEM-T Easy载体中,获得GoCV全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆质粒pGEMT-2GoCV。EcoRⅠ酶切线性化pGEMT-2GoCV,与脂质体混合转染GoCV阴性鹅胚和雏鹅,常规PCR检测发现GoCV在转染鹅体内增殖,鹅胚转染组于孵出第2周和第4周检出血清阳性,且其中一个个体于4周龄扑杀时检出法氏囊阳性,雏鹅转染组于转染后2周检出血清阳性。试验进一步对扩增片段进行了BamHⅠ标记位点的检测,并应用GoCV实时荧光定量PCR方法对转染阳性样品进行了定量,结果显示阳性法氏囊组织中病毒含量为1.57×106拷贝/mg,阳性血清含病毒拷贝数在3.52×104～5.92×105拷贝/μL。综上,本试验构建的GoCV全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆DNA可以转染鹅胚和雏鹅并增殖出带标记的GoCV克隆。     

浙东白鹅催乳素基因表达特点

克隆了浙东白鹅催乳素基因(Prolactin, PRL)的全序列, 并应用荧光定量PCR技术研究了浙东白鹅在产蛋期、就巢期和恢复期时催乳素基因在下丘脑、垂体和卵巢中的表达特点。结果表明, 浙东白鹅催乳素基因在就巢期、产蛋期和恢复期的表达量差异显著(P < 0.05), 在就巢期表达量最高, 产蛋期次之, 恢复期表达量最低。对不同组织PRL的表达量分析, 发现在垂体与卵巢中的表达量、卵巢与下丘脑的表达量均有极显著的差异(P < 0.01), 但在垂体与下丘脑中的表达量差异不显著(P > 0.05), 在垂体表达量最多, 其次是下丘脑, 卵巢中的表达量最低。因此, 浙东白鹅PRL基因在不同繁殖时期体内表达差异较大。